质粒转染求助

我是从公司买的过表达质粒，转染试剂是lip2000，第一次第二次都成功转染了，wb可以跑出flag蛋白，但是第三次开始就一直失败，一样的操作，想问问大家有什么建议吗？我应该怎么排查，第四次转染我换了新提取的质粒dna，新的lip2000，还是没成功。成功的两次我发现细胞会死亡一部分，后面失败的两次就是加完转染液，细胞无任何改变，状态几乎没变化，这种情况可能在哪里出问题？希望各位老师给点参考意见，感谢感谢。