肿瘤DNA甲基化标志物检测及临床应用专家共识（2024版）

正式版

细胞基因组与游离 DNA（cell⁃free DNA，cfDNA）均可用于肿瘤 DNA甲基化检测，常采用组织、血液样本，也可采用尿液、浆膜腔积液、灌洗液、粪便、拭子等样本。针对不同样本类型应注意以下事项：⑴组织样本。组织样本离体后应在低温、水合状态下保存和转运。如不能立即开展后续处理，可选择将组织置于-70 ℃及以下环境，以长期保存；或者制成石蜡包埋组织（formalin⁃fixed paraffin⁃embedded，FFPE），可于室温保存3~5年。⑵血液样本。采集血浆标本，抗凝剂选用 EDTA 或枸橼酸，不可使用肝素。检测 cfDNA 时建议足量采集2×10 mL全血［12］。溶血、脂血和黄疸标本建议重新采集［13］。样本运输过程中应避免机械应力致血细胞破裂，气动管道运输可能增加细胞基因组DNA 释放［14］。目前，临床肿瘤 DNA 甲基化分析常检测的血液组分包括外周血单个核细胞（peripheral blood monocyte，PBMC）、循 环 游 离 DNA（circulating cell⁃free DNA，ccfDNA）、循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA），但不同血液组分的生物学特点存在差异（表 2）。采用普通抗凝采血管时，采集后至分离不宜超出4~6 h，因为后续白细胞稳定性会下降；如条件限制、延迟分离不可避免，则在 4 ℃下保存不超出24 h［15］。采用添加防腐剂的采血管时，建议在 3 d内进行分离［16］。转移无细胞血浆时应严格避免混入细胞及细胞碎片，并转移至低 DNA 吸附管中保存。分离待测组分前不可冷冻保存含有红细胞的全血样本，以免严重溶血。经分离后待测组分可在-70 ℃及以下环境长期保存，注意避免反复冻融，而且解冻过程需置于冰上缓慢进行［17］。⑶新鲜体液及灌洗液样本。如样本含较多血液成分，可进行抗凝处理，避免室温下长时间放置。可通过高速离心及超滤技术富集分离细胞或cfDNA。经分离后，待测组分的处理同血液样本。⑷粪便样本。粪便样本含大量微生物，采集保存过程应遵循所用试剂耗材说明并尽快送检，缩短 DNA抽提前非冷冻保存及运输时间。推荐使用含防腐剂保存液，以减少人源性 DNA 降解。⑸拭子样本。应使用专用采集器，采样后可置于保存液保存或风干保存。风干拭子室温下保存不超过 3 d，后续操作前需加入缓冲液重悬；在保存液中，拭子样本在2~8 ℃下保存不超过7 d，-20 ℃下保存不超过30 d。