转化方法
热激转化法
打开37℃,42℃水浴锅,37℃预热LB培养基。
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μL感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μL 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜培养。