读懂感染性疾病筛查

一、乙型肝炎病毒检测

乙型肝炎病毒(HBV) 是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒，属于包膜病毒。现用于临床的病毒标志物有乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(hep- atitis B virus surface antibody,抗-HBs)、乙型肝炎病毒e 抗原(hepatitis B virus e antigen,HBeAg)、乙 型肝炎病毒e 抗体(hepatitis B virus e antibody,抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBcAg)、乙型肝炎病毒核心抗体(hepatitis B virus core antibody,抗-HBc)、乙型肝炎病 毒表面抗原蛋白前S1 和 前S1 抗体、乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S2 和前S2 抗体、乙型肝炎病 毒 DNA。

【标本来源】

外周血、唾液、尿液。

【常用检测方法】

ELISA 法、化学发光法、RIA 法和分子生物学方法。

(一)乙肝六项检测

传统乙型肝炎病毒标志物检测常为五项联合检测，俗称“乙肝二对半检测”,包括 HBsAg、抗- HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc。随着方法学发展，HBcAg也被加入检测范围。乙型肝炎病毒标志物 检测与分析见下表。

【参考值】

各项指标 ELISA法为阴性(S/CO≤2.1;S/CO: 样品与对照的光密度比值);放射免疫分析

(RIA) 法为阴性。

【临床意义】

1.HBsAg   阳性见于急性乙肝的潜伏期，发病时达高峰；如果发病后3个月不转阴，则易发 展成慢性乙型肝炎或肝硬化。携带者 HBsAg 也呈阳性。HBsAg 是 HBV 的外壳，不含 DNA, 故 HBsAg本身不具传染性；但因其常与 HBV 同时存在，常被用来作为传染性标志之一。

2. 抗-HBs   是保护性抗体，可阻止 HBV 穿过细胞膜进入新的肝细胞。抗-HBs 阳性提示机体对乙肝病毒有一定程度的免疫力。抗-HBs 一般在发病后3～6月才出现，可持续多年。注射过乙 型肝炎疫苗或抗-HBs 免疫球蛋白者，抗-HBs可呈现阳性反应。

3.HBeAg    阳性表明乙型肝炎处于活动期，并有较强的传染性。孕妇阳性可引起垂直传播， 致90%以上的新生儿呈 HBeAg阳性。HBeAg持续阳性，表明肝细胞损害较重，且可转为慢性乙型 肝炎或肝硬化。

4. 抗-HBe   阳性可见于慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌。乙肝急性期即出现抗-HBe 阳性者，易 进展为慢性乙型肝炎；慢性活动性肝炎出现抗-HBe 阳性者可进展为肝硬化；HBeAg 与抗-HBe 均阳 性，且ALT 升高时可进展为原发性肝癌。抗-HBe 阳性表示大部分乙肝病毒被消除，复制减少，传染 性减低，但并非无传染性。

5. 抗-HBc   是HBcAg的抗体，可分为IgM、IgG和 IgA三型。目前常检测抗-HBc 总抗体，也可 分别检测抗-HBc的 IgM、IgG或 IgA。抗-HBc 总抗体主要反映的是抗-HBc IgG。抗-HBc 比 HBsAg 更敏感，可作为HBsAg 阴性的 HBV感染的敏感指标。在HBsAg携带者中多为阳性，在 HBsAg阴性 者中仍有6%左右的阳性率。此外，抗-HBc 检测也可用作乙型肝炎疫苗和血液制品的安全性鉴定 和献血员的筛选。抗-HBcIgG 对机体无保护作用，其阳性可持续数十年甚至终身。

6.HBcAg      存在于 Dane 颗粒的核心部位，是一种核心蛋白，其外面被乙型肝炎表面抗原所 包裹，通常血清中不易检测到游离的 HBcAg。HBcAg阳性，提示病人血清中有感染性的HBV存在， 含量较多表示复制活跃，传染性强，预后较差。

7.乙型肝炎病毒 DNA 测定

乙型肝炎病毒 DNA(HBV-DNA)呈双股环形，是 HBV 的基因物质，也是乙型肝炎的直接诊断 证据。

【参考值】

实时荧光定量 PCR 法为阴性。

【临床意义】

HBV-DNA 阳性是诊断乙型肝炎的佐证，表明 HBV 复制及有传染性。也用于监测应用 HBsAg 疫苗后垂直传播的阻断效果，若 HBV-DNA 阳性表明疫苗阻断效果不佳。

二、丙型肝炎病毒检测

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)为黄病毒属、单链正股 RNA病毒。其基因组为一线状正 股RNA, 全长9500bp; 编码结构蛋白与核心蛋白。临床上诊断 HCV感染的主要标志物为正股 HCV-RNA、抗-HCV IgM 和抗-HCV IgG 测定。

(一)丙型肝炎病毒 RNA 测定

【参考值】

斑点杂交试验、RT-PCR法均为阴性。

【临床意义】

阳性提示 HCV复制活跃，传染性强；HCV-RNA 转阴提示 HCV复制受抑，预后较好。连续观察 HCV-RNA,结合抗-HCV 的动态变化，可作为丙肝的预后判断和干扰素等药物疗效的评价指标。检 测 HCV-RNA,对研究丙型肝炎发病机制和传播途径有重要价值。

(二)丙型肝炎病毒抗体测定

【参考值】

ELISA 法、化学发光法、RIA法均为阴性。

【临床意义】

1. 抗-HCV IgM 抗体  主要用于早期诊断，抗-HCVIgM抗体一般在发病的2～4天出现，最早 于发病的第一天即可检测到，7~15天达高峰。其持续时间一般为1~3个月。持续阳性常可作为 转为慢性肝炎的指标，或是提示病毒持续存在并有复制。

2. 抗-HCV  IgG抗体 阳性表明已有 HCV感染但不能作为感染的早期指标。输血后肝炎有 80%～90%的病人抗-HCVIgG 阳性。经常接受血制品(血浆、全血)治疗的病人可以合并 HCV 的 感染，易使病变转为慢性、肝硬化或肝癌。

三、AIDS 病原体检测

1.HIV  的分离培养 病毒培养是检测 HIV感染最精确的方法， 一般采取培养外周血单核细胞 (PBMC) 的方法进行 HIV的诊断。该方法检测 HIV专一性强，不会出现假阳性，对于确认那些抗 原/抗体检测不确定的个体和阳性母亲新生儿是否感染 HIV有着重要的意义。但是须要有一定数 量的感染细胞存在才能培养和分离出病毒来，因而敏感性差、操作时间长、操作复杂、必须在特定 的P3 实验室中才能进行，且费用较高，不适用于临床常规应用。

2. 抗 HIV-1 和抗 HIV-2 的检测 常用的试验方法有颗粒凝集实验、酶联免疫吸附试验、免疫 荧光法、蛋白印迹法等。

3.p24  抗原检测  在病毒开始复制后即可检测血液中的可溶性 p24 抗原，但易出现假阳性。 因此，阳性结果必须经中和试验确认，该结果才可作为 HIV 感染的辅助诊断依据。HIV-1 p24 抗原 检测阴性，只表示在本试验中无反应，不能排除 HIV 感染。近年来发展的 p24 抗原测定法 (immune-complex disassociate,ICD,免疫复合物解离)是将血清中免疫复合物解离后通过TSA 信号  放大系统使用 ELISA进行检测，使p24 抗原检测的最小检出值由原来的10pg/ml 降低到0.5pg/ml,   在HIV-1 抗体阳性母亲所生婴儿早期的诊断中与RNA 检测相当，与 HIV 核酸检测具有可比性，具  有重要的实用价值。

4.HIV   核酸检测

(1)HIV  病毒载量检测：通过检测 HIV RNA水平来反映病毒载量，可用于 HIV的早期诊断，如 窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。常用的测定方法有反转 录PCR实 验(RT-PCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实验(bDNA) 等。采用实时定 量荧光 PCR 方法，能够在 HIV 感染后的前两周检测到病毒核酸。

(2)HIV   耐药基因型检测：HIV 感染者抗病毒治疗时，病毒载量下降不明显或抗病毒治疗失败  时，需要进行 HIV病毒耐药性检测。常用检测方法有：①DNA 序列分析法——通过测定 RT-PCR   所扩增的蛋白酶和RT酶的核酸序列，与参比毒株的核酸序列进行比对，了解耐药位点是否发生变  异，该方法技术成熟，能够提供较为全面的耐药突变信息，可以分析交叉耐药与多重耐药的情况， 现已有商品化试剂盒；②分子杂交分析法——需要的核酸扩增产物较少，敏感性较 DNA 序列分析 法高，但只能分析已知有限的耐药变异位点，包括特异性引物 PCR 分析法、异源双链轨迹试验、基 因芯片分析法、PCR-连接酶测定法等。

5. 其他实验室检查  CD4 细胞计数及其他机会性感染病原体检测，如卡氏肺孢子菌、隐孢子 虫、弓形虫、肝炎病毒、巨细胞病毒、细菌、真菌和Kaposi 肉瘤、淋巴瘤的相关检查。

四、梅毒病原体检测

1. 暗视野显微镜检查 是诊断早期梅毒快速、可靠的方法，尤其对已出现硬下痞而梅毒血清 反应仍呈阴性者意义更大。此外，还有直接荧光素标记抗体检查法及涂片染色检查法。

2. 梅毒血清学试验  诊断梅毒常要依靠血清学检查，潜伏期梅毒血清学诊断尤为重要。人体 感染梅毒螺旋体后，可产生抗梅毒螺旋体抗体IgM 及 IgG,也可产生反应素，用不同的抗原来检测 体内是否存在抗梅毒螺旋体抗体或反应素以诊断梅毒。

(1)非梅毒螺旋体抗原试验：目前常用性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory  test,VDRL)、快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma regain circle card test,RPR)及甲苯胺红不 加热血清反应素试验(syphilis toluidine red untreated serum test,TRUST)。

(2)梅毒螺旋体抗原试验：检测血清中梅毒螺旋体抗体，其敏感性和特异性均较高，现常用荧 光螺旋体抗体吸收试验(fuorescent treponemal antibody absorption test,FTA-ABS)、梅毒螺旋体血凝 试验(treponema pallidum hemagglutination assay,TPHA) 、ELISA 及化学发光方法。

3. 脑脊液检查 对神经梅毒，尤其是无症状性神经梅毒的诊断、治疗及预后均有意义。检查项目包括淋巴细胞≥10×10⁶/L,蛋白量50mg/dl,VDRL 试验阳性等有诊断价值。脑脊液 PCR 检 测，可以快速准确的诊断神经性梅毒。

4. 基因诊断技术检测梅毒螺旋体(TP-PCR  )  TP-PCR 检测梅毒螺旋体 DNA, 特异性强，敏感性高，适用于梅毒孕妇羊水、新生儿血清和脑脊液标本的检查。PCR 检测梅毒螺旋体的 DNA, 其 敏感性、特异性均优于血清学方法。