关于小鼠脑组织NLRP3蛋白条带的问题

跑的小鼠脑组织NLRP3, 分子量118左右，泳道1、6是marker

上图是用的万类的一抗（1:1000），用过三鹰的也跑不出来。

图中的抗体与marker也结合了吗？

蛋白条带位置不对是蛋白降解了吗？

电泳8%的胶， 80V90min；转膜20%甲醇，没加SDS，300mA, 2h；快速封闭液1h；一抗4℃过夜。