增殖实验之CCK-8

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

1） 细胞铺板：将生长良好的细胞铺板于96孔板，每孔5000个细胞，培养6小时。设置好空白孔，对照孔，样本孔，其中空白孔不铺细胞；

2） 处理：对照孔中只换液不加药物，于样本孔中加入不同浓度的药物，空白孔只加培养基，每个处理组设置6个以上复孔；

3） CCK-8孵育：24小时后，弃去2）中所有的培养液，用培养基（有颜色的药物可以直接用1×PBS来洗涤）轻柔洗涤3遍后，加入100μL含10%CCK-8培养基，37℃培养箱，孵育30min至2h;

4） 检测：观察颜色稳定后，在450nm处检测吸光度值（Ab），计算细胞存活率。计算公式为：细胞存活率（%）=（Ab样本孔-Ab空白孔）/（Ab对照孔-Ab空白孔）×100。

CCK-8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。