血片制作与染色

一、材料

玻片：推玻片（具有光滑的边缘）、载玻片；一次性采血针；75%的医用消毒酒精；

棉签；标签纸、笔：载玻片上标识与编号；玻片盒。

二、血片制作

第一步：患者信息的核实

第二步：血样的采集

第三步：厚血膜的涂制：用推片的一角，从取血部位刮取约4-5μl血量（相当于火柴头大小）；血滴置于载片的中央偏右1/3; 由里向外一个方向划圈(2-4圈)涂成直径为0.8~1cm; 厚薄均匀、圆形厚血膜。

第四步：薄血膜的涂制：取血液1-1.5μl  ；血滴置于载玻片中央；将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，两玻片保持45°角；推成舌状薄血膜，长约2-2.5CM。

血膜的编号：制成血片后，用铅笔或记号笔将编号写于血片右侧，编号要与登记本及结果报告单上的编号相一致，以防差错。

三、两种染色方法:

吉氏( Giemsa )染色法；瑞氏(Wright)染色法

第一步：薄血膜的固定

将涂片的血膜面向上，厚血膜在上端，略倾斜放置，干后用小玻棒蘸甲醇在薄血膜上轻轻抹过以固定薄血膜。

注意：血片完全干燥后才可固定，染色；厚血膜不能固定

第二步：染色用水和冲洗用水配制

用pH7.0～pH7.2的缓冲液效果最佳；

第三步：染色

薄血膜经甲醇固定干燥后，将血片平放；用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液(PBS)或蒸馏水将吉氏原液稀释，原液与缓冲液为1:9(1ml吉氏原液加9ml缓冲液 ); 染色20-30分钟，清水缓缓冲洗，晾干，待镜检。

厚血膜溶血染色：放置多时未染色的血片（2天以上，薄片已用甲醇固定），在染色之前，须在厚血膜上用清水进行溶血，待血膜全部溶解后倒掉，用3-5%吉氏染液染色,清水漂洗干净,晾干。

如果血片偏红,说明染液偏酸性；如果血片偏蓝,说明染液偏硷性。

上图从上到下依次是，偏酸，标准，偏碱。

四、血片制作影响因素

1、载玻片必须清洁无油污;

2、涂制血片顺序，从右至左，先涂制厚血膜，再涂制薄血膜

3、固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜;

4、理想的薄血膜是一层血细胞均匀分布不重叠、无裂缝、无皱折和空泡，血膜末端呈舌状；厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜；

5、血片制作场所要保持清洁；

6、制成的血片在未干前不能倾斜放置，待其自然干燥，不要高温加热，避免使原虫变形，影响镜检结果;

7、现场检查的血片厚血膜可以不溶血，直接染色。

8、保存时间较长的标本片厚血膜要溶血后保存。

9、放置2天以上的血片，在染色之前先用清水滴加在厚血膜上进行溶血，再进行染色；

已稀释的吉氏染液，须在30分钟内用完。