人肝素钠外周血分离PBMC检测Th17细胞,上流式后细胞特别少

各位大佬好,最近在检测人的Th17细胞,染的是CD4和IL-17A,我在对刺激完成的PBMC进行固定破膜染胞内的IL-17A之后发现细胞沉淀非常少,并且上流式后能检测到的细胞非常少,不知道是可能是中间哪个步骤导致细胞损失特别多呢?(同一样本检测Treg细胞时细胞是很多的)
各位大佬好,最近在检测人的Th17细胞,染的是CD4和IL-17A,我在对刺激完成的PBMC进行固定破膜染胞内的IL-17A之后发现细胞沉淀非常少,并且上流式后能检测到的细胞非常少,不知道是可能是中间哪个步骤导致细胞损失特别多呢?(同一样本检测Treg细胞时细胞是很多的)