中性粒细胞胞外陷阱NETs染色求助

在不少硕博论文中看到可以直接在24孔板里加sytox green室温避光孵育后拿去拍免疫荧光看中性粒细胞释放出的dna。昨天我用sytox green染色之后发现镜下的确可以看到些许网状结构，但sytox green没有充分混匀，不能确定是染料发光还是染到了胞外dna。有以下几个问题：

1.直接在24孔板里拍照的话可不可以利用摇床把染料混匀？如果可以的话时间、转速多少合适呢？

2.朋友说可以效仿流式给中性粒细胞染色，既在离心管里进行染色-离心-弃上清，pbs洗涤-离心、重悬后铺至24孔板/滴到载玻片上拍免疫荧光，这种方法可行吗？（她也没做过）

3.看到有人染了sytox green和hoechst，通过荧光显微镜计算NETs百分比，是用sytox green面积除以sytox green 与hoechst面积之和吗？