PEI转染质粒失败了,老师们帮忙分析一下原因
想到几个不妥之处,会不会是问题所在。
1、PEI配的时候,固体氢氧化钠加多了,配到PH值8.6放了1晚上第二天才拿稀盐酸纠正到中性的,这一晚上的碱性溶液会不会使PEI失效。
2、纯水溶解PEI的时候,没有找到磁力搅拌棒,就拿超声波清洗机混匀的,现在想起来,想到超声波会不会破坏PEI结构。
3、转染体系加入后10h换完全培养基的,之后约24和48小时的时候在荧光显微镜下观察了2次,都没有看到荧光,是否有必要继续观察(都2天了,还一点荧光都没有,我觉得希望不大了)。