请教｜目的蛋白（31kD）和杂蛋白（主要是15kD和29kD）难以分离怎么办？

目前使用10kD的膜包进行超滤，离子交换的条件是填料为MMC（和我的目的蛋白结合较好，即使5ml的柱子上样45ml，目的蛋白也没有流穿），缓冲液是磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，ph6、5.5和8都有尝试，但是纯化效果不行。

上图是离子交换，缓冲液ph5.5时的出峰情况。从右至左依次是B液浓度20%至100%。目的蛋白从20%开始出峰，一直到60%。最后两个条带是B液浓度为100%时的峰。

上图是离子交换，缓冲液ph8时的出峰情况。从左至右依次是进样，marker，流穿1，流穿2，流穿3，20%，30%，40%，50%，60%。目的蛋白从20%开始出峰，一直到60%。最后两个条带是B液浓度为100%时的峰。

上图是离子交换，使用sp柱，缓冲液ph6时的出峰情况。从左至右依次是流穿，10%峰1，20%峰2，20%峰3，30%峰4，30%峰5，40%峰6，marker，进样。目的蛋白在B液浓度为30%时浓度最大。

更换填料后纯化效果改善了一点，但仍不算特别理想，周末尝试优化梯度再次进行离子交换。因为目前实验室离子交换仪器紧张，一周最多能做两次实验，所以希望大家提一下建议帮助我。感谢感谢。

目前改换了填料，纯化效果很不错🤗幸好自己坚持下来了。

蛋白版12月活动