有奖直播 | qPCR 曲线杂乱、重复性差？你可能忽略了这些点

qPCR 实验忙活一周，一看曲线两眼「懵」，不是溶解曲线杂乱无章，就是扩增曲线飘忽不定，更糟糕的是 RNA 降解、复孔重复性差、CT 值异常等问题层出不穷…….饱经 qPCR 摧残的过来人表示，竹篮打水一场空的结局屡见不鲜。qPCR 问题千千万，不能一概而论，对症下药最重要！

如果你也有以上 qPCR 实验问题，别慌！为了让大家少走弯路，11 月 15 日 19:00 赛默飞联合丁香园开展 qPCR 专题直播课程，围绕「从入门到精通，qPCR 疑难、技巧轻松搞定」，全方位剖析 qPCR 实验技巧、并有常见问题解析和案例分享，帮助大家实现实验进阶，得到理想曲线和数据。

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直播内容抢先看：

1. 如何设计「好」引物？qPCR引物设计原则及注意点：

引物设计跨内含子（防止非特异性扩增），注意不同转录本之间的差异，扩增效率在90~110%之间，引物特异性验证（Primer-Blast序列比对及溶解曲线分析）。

2. CT 值异常分析：

CT 值过大：可能是模板浓度低，扩增效率低或者体系存在 PCR 抑制物。应注意提高模板浓度，降低退火温度等优化反应程序。

CT 值过低：可能是模板浓度高，引物设计不合适。因此应减少模板量或稀释 cDNA，优化程序避免非特异性扩增。

CT 值重复性差：仪器、试剂、耗材、实验操作细节等众多因素，具体问题具体分析。

3. qPCR 扩增曲线异常：正常扩增曲线应呈平滑 S 型。

常见异常包括扩增曲线锯齿状（RNA 浓度低或体系含有杂质）。

无法到达平台期（模板浓度太低，循环数太少或扩增效率低）。

除了 CT 值、扩增曲线异常，我们还常遇到 RNA 降解、引物特异性差等各种问题！报名本次直播，带你从实验流程出发，聚焦 qPCR 疑难问题、实验技巧分享。现场还有一对一答疑、有机会赢取美的暖风机、膳魔师不锈钢真空保温杯、小米电吹风、不锈钢指甲套装、帆布包等 120 份好礼！ 

内容策划：邹礼平

内容审核：钟可可

题图来源：图虫创意