His-tag蛋白纯化，有杂带，求大佬帮忙分析
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求大佬帮忙分析原因，之前没做过纯化，这次已经耽误了俩月了，一直没做出来。
首先是诱导前诱导后菌体直接加1XSDS煮样跑wb，敷His抗体，除红色圈的目的蛋白，其他绿色圈为杂带。
然后纯化后收集到的洗脱液考染图如下，所以这些杂带也带了His标签。刚拿纯化出来的样品跑wb同时敷了目的蛋白抗体和His抗体，发现条带一样，所以
1：降解的条带吗（之前裂菌体跑WB时确实没加酶抑，纯化时加的pmsf是很多年前的，可能已经过期）。
2：还是标签蛋白位置不对导致的翻译问题啊，His是加在了融合蛋白两侧。
求大家帮忙分析，老板只会说我效率低，说他之前做纯化的时候就没有这么多非特异，我服了，他的是GST，我的是His，又不是一个质粒
最后编辑于 2023-10-16 · 浏览 1120
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