求助/泳道黑是哪个环节出问题了

是滴我又来了，暑假一个都没跑出来~换了个一抗现在算出来了，但是不知道哪个才是。再这样下去毕不了业了。（第一个是actin，后面两个是目标蛋白，第三张图好像maker也显影，好奇怪）感觉没封闭好，毕竟内参也不干净，而且不齐！目标蛋白110kD，按正常应该在第三张图中间大黑maker偏上一点的位置，但是那里又刚好是一条白线。总之拜托大佬们给出点改进意见，谢谢各位。