求助/条带黑又不完全黑

比上次一抹黑好了一丢丢，但是这个黑中带点白也实属看不懂。是蛋白加多了（25ug）引起的淬灭？还是蛋白降解了？或者一抗二抗有问题？（一抗1:1000最高稀释浓度，二抗1:5000，都是abcom的）不过出现这种条带应该转上了吧？内参干净无背景，就目标条带每次都出不来。