基因克隆结果假阳性,求大佬解惑

使用无缝克隆,将目的片段两端添加同源臂扩增后,连接到酶切后的载体后,挑了3个菌提质粒,使用扩增目的片段的引物跑PCR有条带(片段大小为目的片段条带),酶切结果隐约能看到目的片段,但是很淡。3个阳性质粒送去测序结果显示没有连上,测序结果为未酶切开的载体质粒,可是PCR结果分明就有目的片段大小条带,为什么呢?

最后编辑于 2023-08-22 · 浏览 1046
使用无缝克隆,将目的片段两端添加同源臂扩增后,连接到酶切后的载体后,挑了3个菌提质粒,使用扩增目的片段的引物跑PCR有条带(片段大小为目的片段条带),酶切结果隐约能看到目的片段,但是很淡。3个阳性质粒送去测序结果显示没有连上,测序结果为未酶切开的载体质粒,可是PCR结果分明就有目的片段大小条带,为什么呢?
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