求助：重组质粒构建

大家好，我想问一下重组质粒的构建！

我用的是pcDNA3.1(+)载体，往上插目的基因1：GFP（HindIII和KpnI这两个上下游酶切位点），这个pcDNA3.1-GFP质粒已经构建成功，已测序，但是我想往pcDNA3.1-GFP这个质粒上插第二个目的基因2：IL2。IL2只有72bp，我设计的是通过退火直接合成带有切后酶切位点的两条双链（NheI和HindIII），反应体系是载体4μl（16ng/μl）、IL2 2μl，16℃连接了5-6小时，转化，有单克隆长出，但做了好多次都不是阳性，所以想问一下，我的步骤哪里有问题，怎么才可以将IL2连接到pcDNA3.1-GFP上。