WB实验遇到的问题

各位大神，我想问一下关于转膜，一开始我忘加甲醇了，转膜转了十几分钟，然后突然想起来，重新配了转膜液，但未预冷，就直接加入电泳槽继续开始转膜，溶液有些许温热，但几分钟后我又换了一个新的冰袋，后面转膜都很顺利，这对转膜影响大吗？转膜结束后，marker蛋白有点浅，然后用丽春红染色半小时后，条带都很浅，而且marker蛋白颜色消失了，这又是怎么回事？