前沿速递：又一细胞治疗产品获批临床，iPSC基因编辑功不可没！

2023年7月18日，国家药监局药品审评中心官网显示，由启函生物研制的QN-019a细胞注射液的临床试验申请已获得默示许可。QN-019a是一款靶向CD19的同种异体CAR-NK细胞，通过多位点基因编辑技术修改人源多能诱导干细胞（iPSC）并由此分化而来，这是中国首个获批的基因编辑iPSC来源的细胞治疗产品。

图1 iPSC体外疾病模型研究思路

为什么选用iPSC基因编辑模型？

1.小鼠模型不能完全展现人类疾病的表型与发生机制，使用基因编辑iPSC细胞疾病模型更能模拟人类疾病的发生。

2.可创造遗传背景单一的细胞系，减少因遗传背景差异而导致的表型变异。

3.iPSC在体外可无限扩增和定向分化，有利于大规模的药物筛选和替代较难获得的原代细胞系。

以iPSC-hTNFAIP8L2-KO为例

通过CRISPR/Cas9基因编辑技术，在诱导性多能干细胞iPSC中敲除Human TNFAIP8L2基因。通过小片段的敲除方法，在TNFAIP8L2的2号外显子设置两条sgRNA，预计删除2号外显子300 bp。经过PCR和测序鉴定，确定获得TNFAIP8L2基因敲除的纯合IPS细胞。再通过免疫荧光染色，检测NANOG、OCT4和SOX2三个干性标记基因，均能检测出阳性信号，表明该敲除细胞具有干性。

图2 hTNFAIP8L2的敲除策略

图3 iPSC-hTNFAIP8L2-KO测序检测

图4 iPSC-hTNFAIP8L2-KO干性检测