［求助］FISH石蜡切片结肠组织细菌浸润

65℃烤片2小时

立即放入二甲苯中 15minX2

无水乙醇5minX2

DEPC水浸泡30min

修复：枸橼酸钠高火5min-加入切片后-高火5min-中低火15min

消化：蛋白酶K20ug/ml 55℃(根据蛋白酶K说明书) 20min  

PBS洗涤5minX3 (PBS高压灭菌)

预杂交：杂交液（含有15-20%甲酰胺） 37℃ 1小时

杂交：含有探针的杂交液 （细菌16sRNA标记的荧光探针 Desulfovibrio-5`CY3和EUB338-5`EUB 探针浓度1/1.5/2ng/ul） 37℃ 18-20小时

洗涤：

2XSSC 37℃ 10min 

1XSSC 37℃ 5minX2 

0.5SSC RT 10min

封片：抗荧光淬灭剂（含DAPI）干燥5min

拍摄：正置显微镜 

 Desulfovibrio-5`CY3-红

EUB338-5`FITC -绿

疑问和请教：

如图， Desulfovibrio-5`CY3-红，这里的亮点处，大概率不是红细胞和蜡点，（红细胞和蜡点都是那种特别亮的大颗粒亮点）如果是Desulfovibrio的话，那说明操作OK，同一批出来的片子，操作都一样，那为什么EUB338-5`FITC -绿就没有呢，请各位大佬指点一二，万分感谢