HK2细胞在96孔板里面长不出来，为什么？
Q：hk2细胞在正常皿里面长的很好，铺板10000个细胞到96孔板里面却张不起来 显微镜下看细胞跟死了一样，到底会是什么原因呢？
A1：可能是细胞生长状态的原因，还可能和自己铺板的密度有关，把细胞加入96孔板之前需要吹匀，加的均匀一点
A2：有可能是密度低了，或者96孔板子的问题
A3：有可能是细胞生长状态的原因 还可能和自己铺板的密度有关,把细胞加入96孔板之前需要吹匀,加的均匀一点 细胞生长,有时会出现密度依赖性的情况。
A4：主要考虑培养基特及血清不合适，或细胞接种密度过低。
给以下几点建议:1.HK-2最初建系使用无血清培养，MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的条件下，HK2细胞也能良好生长。
2.胎牛血清的质量是关键，胎牛血清品质越高，HK-2状态越好。
3.若使用无血清培养基培养，需要使用多聚赖氨酸或者明胶包被培养瓶，以促使贴壁。
Q：erastin 是铁死亡激动剂(抑制xc-)，但是为啥能降低Fe2+？机制是什么
A1：促进铁死亡过程中会消耗掉fe2+
A2：铁调节蛋白2可以结合铁蛋白和铁转运蛋白5-UTR端的铁反应序列，抑制其mRNA翻译。铁蛋白和铁转运蛋白的耗尽导致细胞铁的积累，诱导细胞铁的死亡。过量的铁负荷可以通过芬顿反应产生活性氧，从而促进细胞铁的死亡。三价铁离子通过与转铁蛋白的结合，成为人体内循环铁的代谢。三价铁通过细胞膜上的转铁蛋白受体进入细胞并定位在核体内，还原为二价铁，最终在二价金属离子转运体的介导下释放到细胞质中。
A3：使用铁螯合剂可以抑制Erastin诱导的细胞铁死亡,而增加铁来源可以促进Erastin诱导的细胞铁死亡
Q：请问在提取脾脏免疫细胞之前，把脾脏放置在hbss中等待之后的研磨，那么最长可以放多久保持新鲜再研磨呢？
A1：一般来说,为了保持组织样本的新鲜度和细胞活力,组织获取后应尽快进行处理。将脾脏放在HBSS缓冲液中可以短时间保持组织活性,但时间不宜过长,通常建议在1-2小时内进行后续处理。具体时间还需要根据样本量和状态来判断。
A2：脾脏最好是立即研磨，放在外面多久都是对提取细胞有影响
A3：分离液易挥发，在脾脏研磨过程中请尽量缩短时间，将研磨时间控制在5min以内。
Q：HUVEC加药前需要饥饿吗？用血清浓度是多少？
A1：需要饥饿处理，用10-15%都可以
A2：在给药物干预时，需要细胞在饥饿处理。去除血清双抗使HUVEC细胞饥饿3-6小时
A3：需要饥饿的，不然无法排出代谢相关影响。血清5%-10%就可以
A4：对于细胞培养实验,加药前是否需要饥饿细胞,需要根据实验目的来决定。 一般来说,如果要研究某种药物对细胞增殖的影响,不需要在加药前饥饿细胞。但是如果要研究细胞代谢方面的变化,则可能需要在加药前将细胞置于无血清或者低血清的条件下饥饿一段时间。
血清的标准浓度对HUVEC细胞是5-10%。所以如果实验目的不需要饥饿细胞,加药前可以直接使用含有5-10%血清的培养基即可。
Q：UV造模的时候，细胞需要将完全培养基换成无血清培养基或pbs吗，对照需要换吗，照射完是否需要放到培养箱继续培养24h后再测活力。
A1：对,制作细胞模型时,通常需要将完全培养基更换为无血清培养基或PBS,以减少营养因子的影响。对照组也需要进行相同的操作,以保证实验条件一致。照射后,最好将细胞继续培养24小时,然后再进行活力测定实验。具体操作步骤如下:
1. 将细胞以适当密度接种在带有完全培养基的培养皿或培养瓶中,培养过夜。
2. 当细胞融合度达到70-80%时,吸掉完全培养基,用PBS轻轻洗涤2-3次。
3. 在对照组和实验组中分别加入预热的无血清培养基或PBS。
4. 对实验组进行照射处理,对照组不进行照射。
5. 将两组细胞接种物放入培养箱,培养24小时。
6. 24小时后,吸除无血清培养基或PBS,按照活力测定试剂盒说明书进行后续检测。
A2：可以不需要对换的，有条件对换更好的
A3：UV造模时建议将完全培养基换成无血清培养基为好。
A4：对照和实验组都需要换成无血清的培养基
丁香实验 × 赛默飞——蛋白质组学篇活动开始啦！
活动期间，在丁香实验小程序上发布实验问题，还有有机会获得由赛默飞赞助的小米蓝牙耳机、保温杯、加湿器等精美好礼，快来参与吧～
活动时间：即日起至 8 月 26 日
怎么才能获得这些奖励呢？轻松几步拿大奖
Step 1：微信搜索「丁香实验」小程序，点击底部【我要提问】或点击顶部轮播图【蛋白质组学篇专场】；
Step 2：输入想问的组学实验相关问题；
Step 3：选择任意实验栏目，勾选「飞常实验帮-组学提问赢大奖」活动，点击提交。
Step 4：成功提问自动跳转填写收货地址，或点此填写 https://dxy.me/HLx6js
****************************
【活动规则】
①提交真实的组学实验相关问题，并且通过审核，在前台发布，视为成功参与
②按照提问通过审核的个数，发放对应奖励。
-前 100 名有效提问 1 个：可获得丁香园鼻子纸 1 份
-前 30 名有效提问 2 个： 可获得加湿器 1 个
-前 3-10 位有效提问 3 个： 可获得可可保温杯 1 个
-前 2 位有效提问 3 个： 可获得小米蓝牙耳机 1 个
备注：以上礼品不累加、同一手机用户不重复获奖
③通过审核，符合奖励发放要求的，活动结束后 21 个工作日内统一邮寄。
④ 活动最终解释权，归丁香实验所有。
****************************
欢迎大家将自己的提问，分享至自己的实验室群、学习群等科研人聚集地，帮助有相同实验问题的同学，一同查看解决方案哦～
举办活动的初衷是为了帮助大家解决科研实验问题，如果系统识别到恶意刷榜挤占榜单，无效不相关问题，一律不予发货哦，请大家公平参与！
有专家大牛坐镇，还能领取惊喜好礼，从现在起到 8 月 26 日都可以参与活动哦，赶快来参加吧！
最后编辑于 2023-08-09 · 浏览 2082
