【求助】人脐血间充质干细胞不贴壁

图3

图2

图1

本人科研小白，刚开始进行人脐血间充质干细胞的提取与培养。遇到了各种问题，恳请有相关经验的前辈们不吝赐教！！！万分感谢！！！

我使用的是密度梯度离心法从人脐带血中提取单核细胞，使用的是1.077密度的Ficoll分离液。分离的这一步结果还可以，得到的细胞数不少。

培养使用的是stemcell的间充质干细胞培养基和配套的营养因子。预想的情况是：间充质干细胞贴壁，其他细胞不贴壁且慢慢死亡，不断换液后就得到纯化的间充质干细胞。

但现在的情况是细胞贴壁非常慢（图1）。之前也尝试过使用赖氨酸包被培养皿、stemcell的Animal Component-Free Cell Attachment Substrate（增加皿底吸附）、CT处理培养皿，也都不贴壁，甚至细胞都死了。

一开始提取后即培养时，培养一周后皿底一小块贴壁了（图2），占整个皿二十分之一面积左右，细胞密度特别大又消化不下来，只能用细胞刮刮下，细胞都死了。后续冻存又复苏后培养时也有部分细胞贴壁，终于不是圆形的了（图3），与上次贴壁形态不同，哪种才是间充质干细胞啊？我查的文献中间充质干细胞是梭状的，那我的形态不是啊。（图片使用400倍显微镜拍摄）

请有经验的大神帮忙分析，不胜感谢！！！