DH10Bac转化问题
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最近在做昆虫杆状病毒表达系统，目的基因（900多bp）构建到pfastbac1载体上，转到DH10Bac之后，用M13F/R做菌落PCR扩增只有300bp左右的条带，用目的基因片段上对应的特异性引物扩增就是没有条带。应该是没有成功转座，不知道是什么原因。
连接了目的基因的pfastbac1质粒做过测序，目的基因应该是连上了。
转化DH10Bac的步骤:
取3ng的质粒加入到100u lDH10Bac感受态中（DH10Bac是商业化的），冰上放置30min，随后42℃热激90S，冰上2min，再加900ul的无抗LB。37℃ 200rpm培养4小时。然后，将菌液分别稀释10倍，稀释100倍，分别吸取100ul涂板，37℃培养48h。我一般原液也会涂个板子。板子是三抗的，加了卡那，四环素，庆大，X-gal 和IPTG的。也做过不加X-gal 和IPTG的板子，只要长出来的菌都挑出一些去菌P，但结果是一样的。
做了很多次，板子37℃放了48小时后，感觉几乎没有白斑，很多小的白斑中间也有些蓝点。尽量挑了像白斑的菌落，再摇起来，做菌液PCR，用通用引物M13扩增就只有300bp左右。
目前不太清楚，为什么没有转座成功，有没有大佬知道原因在哪的？求指教！！！
最后编辑于 2023-07-05 · 浏览 2146
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