求助 wb跑组织actin有marker无蛋白条带
电泳:80V+120V跑的
转膜时间:200mA,70min(三明治,5层滤纸)
膜活化:PVDF膜甲醇几分钟,然后转膜液里面泡了30s放在滤纸上
封闭:5%牛奶
一抗:1:40000,2%牛奶,过夜
二抗:1:25000,2%牛奶,1h
问题:胶凝得不好,孔里残胶+分离胶浓缩胶分界处有纵向纹路;电泳仪漏(夹板中间漏,液体加到中间满)
结果:有marker但是无蛋白
电泳:80V+120V跑的
转膜时间:200mA,70min(三明治,5层滤纸)
膜活化:PVDF膜甲醇几分钟,然后转膜液里面泡了30s放在滤纸上
封闭:5%牛奶
一抗:1:40000,2%牛奶,过夜
二抗:1:25000,2%牛奶,1h
问题:胶凝得不好,孔里残胶+分离胶浓缩胶分界处有纵向纹路;电泳仪漏(夹板中间漏,液体加到中间满)
结果:有marker但是无蛋白