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问题一：

根据你的分析：首先看图片，第一印象是没混匀，溶质没有充分溶解，但是看了你的描述，似乎不太可能？（过期了吗？保存条件有问题吗？），个人觉得可以排除，原因的话我是觉得是你没洗干净板子，建议你拼夕夕买一个海绵🧽垫子洗板子，洗完晾起来。

但是总体而言，这种情况不影响实验结果。因为我就是一个洗板子不干净的男人，后面是小师妹强行。

问题二：

哈哈哈，看来是我的老粉了，谢谢谢谢，新配置的液体电流是比较低一点的，后面会升。总体而言这个转膜的电流趋势上升就是没问题的。

两块三明治同时转，我理解你是中途取掉一块。接着转两块。其实不管什么目的蛋白转膜时间在一定范围不会影响结果，不用中途取下来，直接跑完全程时间。比如90min，不要一块板60 min，一块板90min，有时候转膜体系比较好，60min也不赖，但是也不是每次都好的。所以这是我的建议和观点。

问题三

3.1

你这蛋白跑出来都不在同一个水平线了，考虑你后面内参跑的还行（不是这个吊样），所以给两个意见：

1：浓缩胶厚度高一点

2:蛋白有降解，注意蛋白样品保存和提取环境。重新提取几次

3：尽量用外国比较好的公司产品。武汉三鹰，三塔（哈哈哈，有广告的嫌疑了，）

这个问题，特别脏就用tbst洗几次，时间可以看看我之前的说法，洗膜和封闭那种脏，这个图还不是很明显的问题，还是比较干净的，洗膜和封闭的问题，可以看得像那个水墨画或者是写完字立马一涂抹就脏那种，比较均一，看着比较糟心。可以用tbst洗洗，背景更好看。

3.2

首先：

点样量不均一，看看蛋白浓度是不是对上了？r值＞99%吗，另外也就是一些同学所说的“配平”，你配平了吗？所以蛋白浓度不均一，条带粗细也不均一，看着也不太好。这个是失败的内参。

其次：点样的时候还是得注意注意，从孔洞中间点，快速让蛋白样品向两边扩散，这样扩散相对均匀点。

最后，看看胶制的怎么样？看看我原来的帖

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