茜素红染色怎样诱导细胞到 21 天？
Q：我养的牙周膜干细胞，做茜素红染色，不到10天细胞就成膜脱落了，有什么办法能让细胞诱导到21天？
A1：细胞诱导时间长导致细胞数量太多容易脱落，可以在细胞铺板是时减少铺板细胞数量，防止细胞后面数量过多脱落
Q：请问贴壁细胞RNA的提取,是先将细胞消化下来离心比较好。还是直接将trizol加入到细胞里用刮刀刮下来呢?
A1：建议不用胰酶，因为它会对该实验有影响，直接加入trizol裂解数分钟用细胞刮刀刮下进行后续实验
A2：在6孔板内养的细胞，处理时间到了以后，直接弃上清，用PBS洗2~3遍，把PBS弃净后直接加0.5~1.0mlTRIZol，裂解4~5min后将其移入无RNA酶的EP管中，-80度保存。
A3：贴壁细胞rna提取建议用后者比较好。
A4：个人经验是，不需要消化离心，毕竟胰酶也可能对细胞产生一定的影响。弃上清，用PBS清洗2-3次后，直接加Trizol裂解，静置5min左右后就可以收集到EP管了。多说一句，六孔板的话每个孔加500微升就可。另外全程注意无酶操作，使用的枪头和EP管都需要无酶的
A5：直接将trizol放到细胞内刮下来就可以
Q：RNA提取为什么DNA和蛋白质在中间层和下层即有机相，而RNA在水相
A1：在常规的RNA提取过程中，细胞或组织样品首先被裂解，细胞膜和核膜被破坏，释放出细胞内的各种分子。随后，加入酚酸混合物（例如酚/氯仿），形成两个相，其中有机相和水相。
这种分离主要是由于酚酸混合物的化学特性和密度差异所致。酚酸混合物中的酚主要与蛋白质相互作用，形成酚蛋白复合物，使蛋白质沉淀到有机相中。另一方面，RNA与水相中的水结合，形成水相中的RNA溶液。
DNA和RNA的相互作用性质不同，导致它们在RNA提取过程中表现出不同的分配方式。DNA具有较强的亲酚性，与酚的相互作用较强，因此DNA会与蛋白质一起沉淀到有机相中。而RNA在水相中溶解度较高，更倾向于与水相中的水结合。
需要注意的是，这种分离方法并不是完全特异的，可能会存在一定程度的重叠。因此，在进行RNA提取时，仍需要采取额外的步骤来纯化和去除潜在的污染物，如DNA和蛋白质。常见的方法包括使用DNA酶和蛋白酶进行降解，以及使用RNA纯化柱或其他纯化方法进行进一步处理。
总之，RNA在RNA提取过程中溶于水相，而DNA和蛋白质倾向于沉淀到有机相中，这是由于它们与酚酸混合物的化学相互作用性质和密度差异所导致的。
A2：因为rna提取利用的是trizol试剂的rna保护溶解特性，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。此时RNA被留在水相中，而dna则分离到有机象
A3：在偏酸性条件下，rna更加溶于水
Q：想求问一下大家，pX458敲除质粒在哺乳动物细胞中如何进行筛选，只能用GFP荧光吗？是不是不带有其他抗生素的基因？这个质粒是不是也不能进行慢病毒包装之后再侵染细胞，而只能瞬转之后进行荧光筛选？因为实验室没有细胞分选的仪器，所以我有点困难
A1：敲除质粒可以用GFP荧光筛选，筛选后的质粒可以做慢病毒包装
Q：无内毒素小提质粒，用的索莱宝的试剂盒，加入内毒素清除剂后，看不到油层是何原因？
A1：可能原因：
1、菌体未活化，生长效率低，菌量少，需要活化菌种；
2、属于低拷贝质粒。增加菌液的量；
3、Buffer RB 裂解不充分。
A2：可能是试剂盒变性了，可以清除后加分散剂，有助于油层的形成
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最后编辑于 2023-06-06 · 浏览 997
