pk18mobsacb基因敲除

最近在做谷氨酸棒状杆菌基因敲除，原始菌株是在之前做过敲除的同时敲入。目前敲除第一轮卡那筛选PCR验证得到了目的条带，验证引物设计在上下游同源臂，敲除后条带为800。将转化子挑至无抗的LB培养基30隔夜培养后，稀释涂布至蔗糖培养基上，结果长了满板。PCR验证也没有条带。有没有大佬指导一下啊，重复很多次了，也重新做过感受态。