RIPA提蛋白过程中出现的白色絮状沉淀应如何处理
发布于 2023-05-09 · 浏览 3553 · IP 辽宁辽宁
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站友们，在提取六孔板培养的PMA诱导的THP-1细胞蛋白时，以RIPA：PMSF＝100：1的比例配置裂解液。每孔加入200μL的裂解液后，摇晃六孔板就会出现白色的絮状物。置于冰上裂解30min后，移入1.5ml的EP管中反复吹打后继续冰上静置20min，12000g，4℃，离心10min后，仍存在较大的白色沉淀在离心管底，且此时提取的蛋白含量降低，应如何提高蛋白含量，或如何将白色絮状沉淀彻底裂解？
1 查阅众多发帖后，有老师提出可以用注射器抽提至无明显阻力，或直接超声破碎细胞，除此之外，是否还存在其他办法提高蛋白含量？
2 此情况是否是因裂解液加入量不足导致的，多加裂解液是否合理？
3 离心10min变为离心25-30min可否解决上述问题？
最后编辑于 2023-05-09 · 浏览 3553
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