求助 | 质粒保存在-20℃和-80℃会断裂或者消失吗？

半年前菌液大提完的一管质粒A分装成两管分别冻存在-20和-80℃，其中-20℃的那管我经常拿出来使用，所以反复冻融比较频繁，最近发现质粒转染的效果不如以前了，我重新送测序和测浓度，发现测序没问题，浓度也没有降低。我就分别从-20和-80都吸出1ug质粒A跑核酸电泳，也拿了同期（半年前）一起大提的其他两种质粒B和C也吸取了1ug做阳性对照（其他两种也冻-20℃，转染效果一直很好），发现不管是反复冻融的-20℃的A还是一直保存在-80℃的A，A条带都比反复冻融的B和C要浅很多，但A B C我都是稀释成1ug/10ul 跑的，请问为什么啊？难道就A质粒容易断裂或者消失吗？