抗肿瘤活性细胞实验，初筛活性很好的，做不出 IC50 是什么原因?

丁香实验

发布于 2023-04-20 · 浏览 1333 · IP 浙江浙江

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Q ：我的化合物在初筛浓度时有较好的抑制率，然后做IC50时发现，50做不出来，甚至之前初筛的浓度测出来都不一样

A1：一个可能是细胞状态不一样，另外一个是药物可能降解了，要进行分装

A2：以下是可能的原因及解决方法：

细胞毒性：如果化合物在初筛浓度时显示出抑制作用，但是在进一步测试时却不能产生可靠的IC50值，这可能是因为您的化合物在高浓度下对细胞具有毒性。在这种情况下，您可以尝试降低化合物的最高浓度，并在较低的浓度下进行进一步测试，以确定其对细胞的影响。

细胞增殖率：如果细胞在实验过程中生长得过快或过慢，也可能会影响您的IC50值的测定。如果细胞生长过快，您可以尝试降低细胞培养时间或增加化合物处理时间，以减缓细胞增殖速率。如果细胞生长过慢，您可以尝试增加细胞培养时间或使用更少的化合物浓度来提高细胞增殖率。

实验方法：如果您的实验方法有问题，也可能会导致无法得到可靠的IC50值。例如，如果您的化合物与培养基成分发生反应，或者您的测定方法不准确，这都可能导致IC50值的偏差。在这种情况下，您可以尝试使用不同的培养基或测定方法，以确保您的结果是准确可靠的。

A3：浓度如果不同考虑降解，可以看对照组是否有明显变化，或者反复测量三遍看结果是否可重复

Q ：分离单个核细胞有比较好的Ficoll试剂吗？看的大多数都是淋巴细胞分离液,没有PBMC分离液

A1：Ficoll本身就可以用来分离PBMC，Ficoll 密度梯度离心法可以用于分离外周血单个核细胞。该方法的原理是：单个核细胞的体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为 1.092 左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075 左右。

A2：除了Ficoll，一些常用的单个核细胞分离液还包括Histopaque、Lymphoprep、Percoll等，它们与Ficoll试剂类似，都是通过密度梯度离心分离细胞。

Q ：最近用干扰素-γ对小鼠巨噬细胞RAW264.7进行诱导，发现20ng/mL时细胞活性最高，但是后续进行NO浓度测试时却发现细胞分化了但NO不多，我看有人说要拿100ng/mL去作用24h，可是100那会细胞活性不高，这浓度要怎么选才合适？

A1：一般比较合适的诱导浓度是60-80ng/ml

A2：设个浓度梯度，在不影响细胞活力的情况下选择刺激效果最好的浓度

A3：选择干扰素-γ（IFN-γ）浓度时，需要综合考虑细胞增殖和细胞分化两方面的因素，并且还要考虑实验目的和方法。在您的实验中，您发现20 ng/mL IFN-γ可以提高细胞活性，但是在进行NO浓度测试时却发现细胞分化了但NO不多，这可能是因为IFN-v对细胞的作用方式和机制与NO不同，需要更多的实验来探究这个问题。

对于干扰素-γ（IFN-γ）浓度的选择，可以采用逐步增加浓度的方法进行测试，比如从5 ng/mL开始，每隔一定时间（如24小时）检测细胞的活性和NO产生水平，逐步增加浓度直到达到最优浓度。此外，不同的细胞系和不同的实验条件也可能会影响最佳IFN-γ浓度的选择，因此需要根据实验具体情况进行优化。

需要注意的是，细胞活性和NO产生水平之间并不一定是正相关的关系，有时候可能会出现相反的趋势，这可能是因为IFN-γ同时对细胞增殖和分化产生了影响，需要进一步分析。

Q ：想问一下各位大佬，如果我要提纯，振荡器和摇床有区别吗，如果我想买用振荡器可以吗，那对振荡器有什么要求吗（除了温度）？望指导，谢谢各位

A1：振荡器和摇床都可以用于少突前体胶质细胞提纯，但是要注意振荡器的频率、幅度、时间等参数对细胞的影响。一般来说，振荡器要求具有恒温、恒湿、恒速、可调节等功能，以保证细胞培养的稳定性和效率。

A2：振荡器和摇床的区别在于振荡器的频率一般比较高，如果买振荡器要注意一下频率

Q ：小鼠腹腔注射练习时，我把针已经插入腹部，但是针筒里没有液体或者气体，然后回抽，发现它自动缩回底部，我想问这是插入腹腔了吗

A1：应该是插入腹腔了，可以注射点空气或者pbs

A2：是已经插入腹腔了，一般只会在空腔脏器里面注射器活塞才会自动回到底部。

A3：根据你的描述是负压的状态，可能是插入腹腔了。