wb 目的蛋白可以在不同时间段收吗？

丁香实验

发布于 2023-04-18 · 浏览 1652 · IP 浙江浙江

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48 小时内有问必答~

Q：rt。大部分蛋白我都是24小时收的，因为这个点造模组变化相对比较明显。但是做了时间梯度发现有一种A蛋白它的变化趋势是6小时最低，24小时时趋向于恢复至对照，那么我可以在lps刺激6h后单独收这个蛋白跑wb吗？其他蛋白还是24小时

A1：这个一般是不行的，要保持相同条件。可以设置不同时间点都收获样品，这样数据也更多

A2：可以的，时间是根据实验而定的。

A3：可以根据目的蛋白的变化趋势来确定最佳采样时间点。如果你发现这种A蛋白的变化趋势在6小时时最低，并且在24小时时趋向于恢复至对照水平，那么你可以在6小时时单独收集这个蛋白，而其他蛋白则继续采用24小时的时间点。需要注意的是，不同的蛋白有不同的变化趋势和半衰期，因此最佳采样时间点也会有所不同。

Q：我想问问大家做毛状根的话最后转移到的MS培养基用不用加激素，刚开始做有很多不懂的地方，希望有人可以互相交流一下。

A1：早期是需要另外添加激素的，不然诱导不容易成功

A2：一般来说，在初始毛状根的培养过程中，培养基中的激素浓度需要适当提高，以促进细胞分裂和生长。常用的激素包括吲哚3醋酸（IAA）、激动素（BA）和玉米素（Zeatin）等。随着毛状根的生长和发育，激素浓度可以逐渐降低，以促进毛状根的分化和成熟。

至于转移到MS培养基时是否需要加激素，这也取决于具体的实验设计和物种。如果您正在进行毛状根的维持和扩增，那么可能需要在MS培养基中添加适量的激素来维持毛状根的生长。如果您正在进行毛状根的分化和成熟，那么可能需要降低激素浓度或者去除激素，以促进毛状根的分化为其他组织类型。

总之，对于毛状根的培养和转移，建议根据具体物种和实验设计来选择合适的培养基和激素浓度，并结合实验结果进行优化。

A3：做毛状根的诱导最后转移到的MS培养基不用加激素。

A4：毛状根具有激素自主型生长特性，在培养时不需添加任何激素就能快速生长。但是，不少报道表明外源植物激素或植物生长调节剂的加入对毛状根的生长、形态和次生代谢物的合成均会产生影响。因此，如果您想要更好的控制毛状根的生长和形态，可以考虑添加外源植物激素或植物生长调节剂。

Q：怎么查找一个寄生虫的热休克蛋白(编码该蛋白的基因序列)

A1：在ncbi上面，输入目的基因，选择相应种属后即可搜索出来

A2：打开NCBI主页；

左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称；（输入热休克蛋白基因）

在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属；即可

Q：请问高效液相色谱中怎样确定待测样品和对照品浓度是适合检测的

A1：在高效液相色谱中，可以通过内标法来确定待测样品和对照品的浓度是否适合检测。内标是已知浓度的化合物，它与待测样品一起进入色谱柱进行分离。在分离后，可以通过内标的峰面积与待测样品的峰面积之比来计算待测样品的浓度。另外，对照品浓度与峰面积之比等于样品中浓度与峰面积之比，由此可以计算出样品的浓度。

A2：样品浓度选择需要先确定最高点和最低点，然后在此区间进行实验。

样品浓度最高点的要求主要看色谱柱的承受能力。过高的样品浓度会对柱子产生一定的负荷，一来柱子会有所损伤，二来分离效果也会受到影响。当然要考虑物质的溶解性，与流动相接触瞬间是否有可能析出等问题。

最低点主要还是看实验者对样品的要求。什么样的浓度都是在固定时间出峰，在该位置收集溶液即为你所要求的物质。但是在得到溶液后如何能够提取并纯化，在适当的收率的情况下是否能得到你所期望的物质量。

在制备角度来看，还是应该在不影响分离的情况下将样品浓度尽量提高，同时要考虑色谱柱的承受能力和分离效果及纯度等问题

A3：首先确定样品成分，获取该成分的纯品（对照品），将对照品溶液配制成与样品成分浓度相当的浓度（比如样品浓度是10mg/ml左右，对照品溶液就配制成10mg/ml）。对照品溶液和供试品溶液分别进样，进行色谱分析，获得对照品成分峰面积与供试品溶液峰面积。此时已知对照溶液峰面积，对照溶液浓度，供试品溶液峰面积，求供试品溶液浓度，因为成分在液相中响应值不变，故对照品溶液浓度/对照品溶液峰面积=F（即响应因子）=供试品溶液浓度/供试品溶液峰面积，求得供试品溶液浓度。

如果想算含量，含量=[（浓度X稀释倍数）/供试品称样量]X100%

Q：想请问一下有做过nih3t3慢病毒感染的吗，嘌呤浓度2ug/ml、moi20可以吗？有什么需要注意的没？

A1：puro浓度还是需要再稍微摸索一下，跟细胞状态有关。MOI也需要摸索一下，取决于病毒包装的效果

A2：关于 NIH3T3 细胞的慢病毒感染，嘌呤浓度和 MOI 的选择可能因具体实验条件而异，但是一些常规的注意事项可以参考：

选取适当的病毒载体和转染试剂。一些常用的病毒载体包括 pLenti、pLVX 等，而一些常用的转染试剂包括 Lipofectamine 2000、PolyJet 等。

确定适当的 MOI。 MOI 是指病毒与细胞的接触比，常规建议使用 MOI 为 10-20。

确定适当的抗生素浓度。常用的抗生素如 puromycin 可以用于筛选感染细胞，嘌呤浓度通常在 1-2 μg/mL。

选择合适的时间点进行检测。 NIH3T3 细胞的繁殖周期约为 24-36 小时，通常建议在感染后 2-3 天进行检测，检测时可以采用 Western blot、荧光显微镜等技术。

A3：嘌呤浓度2ug/ml、moi20就可以，注意一下筛选的温度。