请问各位大佬们，买来的鱼精 DNA 钠盐怎么配置成溶液使用，用来形成 DNA 水凝胶的
Q：请问各位大佬们，买来的鱼精 DNA 钠盐怎么配置成溶液使用，用来形成 DNA 水凝胶的
A1：配制方法
NaCl浓度1.0mol/L，NaCl用量为原料量的10倍(W/W)，提取时间lh，95%乙醇用量为料液量的2倍(W/W)。提取鱼精蛋白的最佳工艺条件为=H2SO4浓度为5.0%，用量为原料量的3倍(W/W)，提取时间2h，95%乙醇用量为料液量的3倍(W/W)。
A2：制备方法如下：
称取适量鱼精DNA钠盐，加入去离子水中，使其浓度为1-2mg/mL。
用热水或者微波炉加热，使其溶解。
将溶解后的鱼精DNA钠盐溶液过滤或离心，去除不溶性物质。
加入Tris-HCl缓冲液或其他所需缓冲液，调节pH值。
用NaOH调节溶液的浓度和pH值。
最后根据需要加入甘露醇等保湿剂，可以提高DNA水凝胶的稳定性。
需要注意的是，制备DNA水凝胶的溶液需要避光保存，可以放在4℃冰箱中保存。同时，为了避免DNA水凝胶污染，需要注意无菌操作。
Q：构建重组质粒，加错了抗生素但依旧长了，然后测序结果回来，与参考基因比较，蛋白同源性在99%，碱基序列同源性在99%。能用吗？
A1：这个情况下，构建的重组质粒虽然加错了抗生素，但依旧能够使用。测序结果表明与参考基因比较，蛋白同源性和碱基序列同源性都在99%，说明构建的重组质粒与目标基因或蛋白具有高度相似性。因此，在实验中使用这个重组质粒，可能会得到与预期结果相似的实验结果。但是，加错抗生素可能会对后续实验结果产生一些未知的影响，因此建议在使用前对重组质粒进行进一步的验证和确认。
A2：同源性高，但不保证编码的是同一种蛋白，应该对比一下密码子的简并性，如果是同一氨基酸就没事
A3：相似性定义模糊一点，判断标准和方法也不一样，长得像就是相似。而一致性必须要同一个位点，两碱基或氨基酸完全相等，条件严格的话不能用。
Q：请问质粒能放-80℃保存吗？不会断裂吗
A1：质粒可以在零下80度的环境下保存。
把携带质粒的菌种保存于20%的甘油于－80度可长期保存几年，而仅保存质粒零下20度避免反复冻融就可以长期保存了
A2：一般来说，可以将质粒样品放在-80°C保存。但是，有一些因素需要考虑，如质粒大小、构型、保存时间等。
一些小的、线性的质粒通常可以在-80°C保存数年而不会发生断裂。然而，大的或环状的质粒可能会更容易断裂或失去超螺旋结构，这会导致质粒失活。为了避免这种情况，建议使用质粒DNA提取试剂盒进行提取，或在保存前将质粒DNA纯化并在低盐缓冲液中溶解。
另外，注意在保存质粒样品时使用专门的冷冻盒或样品管，以减少质粒的物理损伤和降解。
A3：质粒比较稳定一般放-20，-80，试过4度放半年会有一点降解但转染效果还是很好。
Q：凝胶电泳点样时把，由于手抖样品一部分加到凝胶上表面了有什么影响啊？
A1：很有可能导致结果不稳定，重新搞一下
A2：样品肯定就跑到缓冲液里面去了，没进胶孔，胶也无法看出来。如果是我的话，我可能用枪把上表面的样品能吸点起来就吸点（操作一定得小心），然后点到新的胶孔里面，能回收一点是一点。
A3：1.产生假阳性结果：如果样品中存在DNA或RNA，由于表面的样品可能会在电场作用下向下移动，导致在凝胶上出现额外的带，从而产生假阳性结果。
2.影响样品扩散：表面的样品可能会阻碍凝胶中样品的扩散，导致凝胶电泳过程中样品的分布不均，从而影响电泳结果。
3.影响样品定量：表面的样品可能会使样品在凝胶上的分布不均，从而影响样品的定量结果。
因此，建议在凝胶电泳点样时，尽量避免将样品加到凝胶表面上，可以通过调整加样的位置来避免这个问题。如果已经出现了这个问题，可以考虑重复实验或者使用其他方法来验证结果。
Q：灭活疫苗如何有效快速破乳，以提取其中抗原的核酸，比如水包油包水的猪圆环病毒2型灭活苗，做了几次尝试，加甲醇，氯仿等都没提取出来
A1：破乳的六种方法如下：
1、长时间静置：将乳浊液放置过夜，一般可分离成澄清的两层。
2、水平旋转摇动分液漏斗：当两液层由于乳化而形成界面不清时，可将分渡漏斗在水平方向上缓慢地旋转摇动，这样可以消除界面处的“泡沫”。促进分层。
3、用滤纸过滤对于电于有树脂状：粘液状悬淫物存在而引起的乳化现象，可将分液漏斗史的物料，甩质地蜜致的滤纸进行减压过滤，过滤后物料则容易分层和分离。
4、加乙醚：比重接近I的溶剂，在萃取或洗涤过程中，容易与水相乳化，这时可加入少量的乙醚，将有机相稀释，使之比重减小，容易分层。
5、加乙醇：对于有乙醚或氯仿形成的乳化液，可加入5-1滴乙醇，再缓缓摇动，则可促使乳化液分层。但此时应注意，萃取剂中混入乙醇，由于分配系数减小，有时会带来不利的影响。
6、离心分离：将乳化混合物移入离心分离机中，进行高速离心分离。
A2：对于灭活疫苗中的抗原提取，一般需要采用一定的方法来破乳和裂解病毒粒子，使其内部的抗原释放到溶液中。以下是一些可能的方法：
冻融法：将样品多次冷冻和解冻，可以使病毒粒子裂解，释放出内部的抗原。
酸碱法：在一定的酸碱条件下，可以使病毒粒子发生裂解，释放出内部的抗原。但需要注意的是，酸碱条件不能过于强烈，否则可能会影响抗原的完整性。
物理法：如超声波、高压等，可以通过物理力学的作用使病毒粒子破裂，释放出内部的抗原。但同样需要注意不要过度破坏抗原。
对于水包油包水的猪圆环病毒2型灭活苗的抗原提取，可以先将疫苗用离心管离心沉淀，去掉上层的油包水部分，留下下层的水包油部分，然后再用上述方法进行破乳和裂解。需要注意的是，不同的样品可能需要不同的抗原提取方法，需要根据具体情况进行优化和选择。此外，提取后的核酸可以通过PCR等方法进行进一步的分析和鉴定。
最后编辑于 2023-04-06 · 浏览 820
