请问大家，在提取软骨组织 RNA 时必须要加乙醚吗？有没有什么替代试剂？
Q：请问大家，在提取软骨组织 RNA 时必须要加乙醚吗？有没有什么替代试剂？谢谢。
A1：可以用氯仿代替乙醚，可以起到一样的效果
Q：小鼠下丘脑 RNA 提取可以做吗？
A1：可以的。下丘脑是大脑的一部分，其中包含许多重要的神经元和神经递质，因此从小鼠下丘脑中提取 RNA 可以用于分析基因表达和信号通路的研究。
RNA 提取的方法可以根据实验室的具体需求而定，例如使用商业 RNA 提取试剂盒或自制试剂盒，根据实验室的设备和技术水平选择合适的方法。需要注意的是，在取样、提取和储存 RNA 过程中，应避免 RNA 降解和污染，以保证实验的准确性和可靠性。
A2：小鼠下丘脑 RNA 可以用 Trizol 法进行提取。
Q：真菌，特别是食药用菌，除了 ITS 基因，还可以用什么鉴定呢
A1：真菌检查的方法包括直接镜检、真菌培养、血清学试验、组织病理检查等，最常用的就是真菌的直接镜检。真菌的直接镜检需要使用酒精清洁创面，可以收取表面的皮屑、毛发、甲板或者体液组织等。将收取的标本放在玻璃片上，加 5%-10% 的氢氧化钾液，盖上盖玻片，溶解一会儿，一般 5 分钟后可以在显微镜下低倍镜下寻找有无菌丝或者孢子，寻找到菌丝或者孢子后可以转为高倍镜进行观察。其他还有通过筛子检验，比重检验法，染色检验法，洗涤检验法，保湿萌芽检验等。
A2：鉴定真菌的方法还包括以下几种：
核糖体 RNA 基因序列分析：核糖体 RNA 基因序列是真菌基因组中高度保守的部分，不同真菌种类之间这些基因序列有显著差异，通过比对真菌样品的核糖体 RNA 基因序列和数据库中的已知真菌的核糖体 RNA 基因序列，可以确定真菌种类。
形态学特征：真菌在形态学特征上具有较大的多样性，通过观察真菌的孢子、菌丝、菌落等形态学特征，可以初步确定真菌种类。
生理生化特性：真菌在生理生化特性上也有差异，通过观察真菌的生长条件、代谢产物等生理生化特性，可以进一步确定真菌种类。
这些方法通常可以结合使用，以提高真菌鉴定的准确性。
A3：酵母的话,是可以做菌落 PCR,跟细菌相似.如果是丝状真菌的话,建议还是提一下 DNA 吧.真菌鉴定目前常用的 ITS 序列,如果是单菌的 DNA 的话,可以参考基因测序
Q：请教 trizol 法提取外泌体 RNA 该如何弄。
A1：以下是 Trizol 法提取外泌体 RNA 的步骤：
收集外泌体：用离心或超声波等方法收集培养基或生理液中的外泌体。建议在收集前，预先处理样品，如去除细胞残留物、碎片等。
加入Trizol：向外泌体悬液中加入 Trizol 试剂，建议加入试剂体积是悬液体积的 10% 到 20%。轻轻摇晃管子使 Trizol 均匀分散。
加入氯仿：加入氯仿等有机溶剂，摇晃离心管混合均匀。离心管在室温下放置5-10分钟，让混合物充分分层。
分离上清：用移液器取出上清液转移到新的离心管中。避免取到下层白色物质。
沉淀RNA：向上清液中加入异丙醇等制备缓冲液，使 RNA 沉淀。使试管上下翻滚混合。
洗涤沉淀：用酒精洗涤沉淀，再用 RNase-free 的乙醚洗涤沉淀，以除去氯仿等有机溶剂。
重悬RNA：向沉淀中加入 RNase-free 的水重悬 RNA。
质检RNA：通过 Nanodrop 或者 Agilent Bioanalyzer 等仪器检测 RNA 质量和浓度。
需要注意的是，在 Trizol 提取过程中，外泌体可能会受到损伤或者破裂，因此提取的 RNA 有可能来自于外泌体本身以及外泌体释放的 RNA，所以需要仔细处理样品，以确保提取的 RNA 来自于外泌体。
Q：质粒电转到毕赤酵母感受态后，涂板，长出菌后，做菌落 pcr 怎么做
A1：可以尝试用快速菌落 PCR 的方法来提取和扩增酵母菌的质粒 DNA。具体步骤如下：
用菌落 PCR 提取酵母菌的质粒 DNA，具体步骤如下：
选取酵母菌菌落，用无菌的 PCR 管刮下一小块菌落。
加入10-20 μL TE缓冲液（pH8.0）或蒸馏水，用微量吸管或者细管破碎菌落。
加入 1 μL 蛋白酶K，37℃ 孵育 5-10 分钟。注意不要过度消化。
将管子放入 100℃ 的水浴中，热搅拌 10 分钟使细胞裂解，然后放到冰上冷却 1-2 分钟。
离心 3-5 分钟，收集上清液。
用上清液作为 PCR 反应的 DNA 模板，进行 PCR 扩增。
菌落 PCR 反应条件：
模板：上述提取的上清液
引物浓度：0.5 μM
Taq聚合酶浓度：2.5 U/25 μL
反应体系：10× Taq缓冲液、2.5 mM dNTPs、MgCl2、模板、引物和Taq聚合酶
反应体积：25 μL
PCR 程序：95℃ 预变性 5 分钟，35-40 个循环（95℃ 变性 30秒、55℃ 退火 30 秒、72℃ 延伸 1-2 分钟），72℃ 最后延伸 10 分钟。
扩增产物可以进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果有特异性条带，则可用提取基因的方法纯化扩增产物进行测序。
需要注意的是，这种方法提取的 DNA 纯度和质量可能不如商用试剂盒提取的好，因此需要进行 PCR 反应前进行一定程度的质检。此外，使用不同菌株的时候，有些酵母菌可能需要更长的 PCR 扩增时间才能够扩增出特异性产物，需要根据实验情况进行调整。
最后编辑于 2023-03-28 · 浏览 872
