PCR实验中A260/280比值低怎么办?
各位站友好,最近我在用传统的Trizol法提取细胞RNA的时候,发现浓度还行,在600—700ng/ul,但是A260/280比值太低,普遍在1.1-1.4之间,仪器提示苯酚含量太高。
原本想着要不直接往下做算了,但是还想着拯救一下子。于是我就再用75%酒精洗一次。方法具体如下:
在已经稀释的RNA液(之前加了10ul的DEPC水)里面加了1ml的75%酒精,轻轻吹打10次后,10000转/min,5min离心,之后倒掉上清酒精,常温下挥发10min,加10ul DEPC水混匀后继续去测浓度。
结果我傻眼了,所有细胞浓度直线下降,结果都在10—15ng/ul,A260/280更低了,1—1.3之间。
请懂行的站友们帮忙分析一下浓度直线下降原因?
我自己分析原因可能是:重新加了酒精吹打混匀后离心的时候,RNA没有完全离下来,导致随着酒精一起倒掉了,所以浓度直线下降。
不知道我分析的对不对,欢迎大家一起讨论。
最后编辑于 2023-03-22 · 浏览 1805