Trizol法提取DNA，A260/280应该在哪个范围比较好？提取的浓度一般是多少
Q：Trizol 法提取 DNA，A260/280 应该在哪个范围比较好？提取的浓度一般是多少
A1：最好在 1.8-2.0 之间的范围比较合适。
A2：一般 A260/280 设置在 1.7-2.0 左右。
A3：纯 DNA 的 A260 /A280 为 1.8一2.0。DNA 的提取浓度通常为 0.2～0.3μg/μl。
A4：对于纯化的 DNA，A260 /A280 比值通常应该在 1.8 到 2.0 之间。这个比值可以用来评估 DNA 的纯度，因为 DNA 在 260nm 处吸收光线，而蛋白质在 280nm 处吸收光线。因此，如果 DNA 样品的 A260/A280 比值小于 1.8，则可能存在蛋白质或其他杂质污染。如果 A260/A280 比值大于2.0，则可能存在 RNA 或其他有机物污染。
Trizol 法提取的 DNA 浓度通常在 10~100 ng/ul 之间，但是具体浓度取决于所提取的样品类型和处理方法。在评估 DNA 浓度时，建议使用比较敏感的光度计（比如NanoDrop），并注意根据样品类型进行稀释以获得合适的浓度。
Q：RNAi 后靶标基因为没有达到预期干扰掉，相反的定量结果显示高表达了WHY？
A1：考虑可能是靶标基因功能存在一定问题。
A2：RNAi 会有两条调节通路，考虑是负反馈高表达了
A3：有时候干扰效率不高，细胞会反馈性高表达
A4：NA 干扰（RNAi）是通过介导特定靶标 mRNA 的降解来抑制基因表达的过程。如果您在 RNAi 实验中没有观察到预期的靶标基因降解，并且发现靶标基因的定量结果显示高表达，可能有以下一些原因：
有效的 RNAi 寡核苷酸（siRNA）不够：RNAi 实验中最常用的方法是使用 siRNA，如果siRNA 的浓度不足或质量不好，则可能无法实现有效的靶标基因降解。
靶标基因存在剪切变异体：靶标基因可能有多个剪切变异体，在 RNAi 实验中可能只抑制了其中一个变异体的表达，而其他变异体的表达却没有受到影响，从而导致总的靶标基因表达量没有降低。
RNAi 可能导致反向调节：一些研究表明，RNAi 也可能导致反向调节，即在 RNAi 过程中，靶标基因的表达量实际上会增加。这可能是由于 RNAi 诱导了一些代偿性反应，使得细胞尝试通过增加靶标基因的表达来抵消 RNAi 诱导的效应。
无关基因的表达发生变化：RNAi 实验可能会导致一些无关基因的表达发生变化，从而影响到靶标基因的表达。例如，RNAi 可能导致一些共同调节因子的表达发生变化，从而影响到多个基因的表达。
综上所述，RNAi 实验中靶标基因高表达的原因可能有很多种，需要仔细分析实验的设计和结果，以确定具体的原因。
Q：脱氧核酶实验是什么实验？
A1：脱氧核酶实验是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的单链 DNA 片段，具有高效的催化活性和结构识别能力，进行未知识别的实验方法。在恶性肿瘤的研究方面有巨大前景
A2：脱氧核酶实验是一种用于检测酶的活性的实验。在这个实验中，使用脱氧核酸（DNA）作为底物，通过观察酶对 DNA 分子的切割能力来测量酶的活性。
通常，在脱氧核酶实验中，将 DNA 分子置于不同条件下（如不同pH、温度等），并添加酶，然后在一定时间后检测 DNA 的切割情况。可以使用凝胶电泳等技术来可视化 DNA分子的切割情况。
脱氧核酶实验通常用于研究 DNA 切割酶、限制性酶等酶的活性、特性和功能，也被广泛用于分子生物学、遗传学和生物技术等领域。
Q：想问问有经验的大佬们，有没有做过髓核间充干细胞的转染啊？可以交流一些转染步骤吗？急急急
A1：转染过程
⑴取 0.67ug(50pmol) 的 siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成 RNA 稀释液，终体积为 25μl。
注意：无血清稀释液建议采用 OPTI-MEM、无血清 DMEM 或 1640。
⑵取 1ul 的 EntransterTM-R4000，然后加入 24ul 无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000 稀释液，终体积为 25μl。室温静置 5 分钟。
⑶将 EntransterTM-R4000 稀释液和 RNA 稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸 10 次以上）混合，室温静置 15 分钟。转染复合物制备完成。
⑷将 50μl 转染复合物滴加到有 0.45ml 全培养基（可含 10% 血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。
A2：可以借鉴一下这篇文章《骨髓间充质干细胞的转染》
一、试验材料：
1、LB 液体造就基：称取蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，氯化钠 10g，溶于 800ml 去离子水中，用 NaOH 调整 PH 到 7.5，加去离子水定容至 1L，高压灭菌 20min.
2、LB 平板造就基：LB 液体造就基中按 1.5% 的浓度参与琼脂，加热溶解，进行高压灭菌。取出后趁热在无菌条件下，倒入无菌的平皿中，每套平皿中参与 12-15ml，凝固后倒置，4℃ 冰箱保存备用。
3、0.1mol/lCaCL2 溶液：称取 1.1g 五水 CaCL2 用双蒸水溶解，定容到 100ml.高压灭菌 20min。
A3：下面是一般的骨髓间充质干细胞转染的步骤：
准备质粒和转染试剂。根据需要表达的基因，准备相应的质粒 DNA，并用纯化试剂盒进行纯化。此外，根据转染试剂的不同，也可以选择不同的转染试剂进行转染。
转染试剂与质粒 DNA 的混合。根据不同的转染试剂，将质粒 DNA 和转染试剂按照说明书上的比例进行混合，通常需要在室温下静置一段时间。
细胞处理。将骨髓间充质干细胞移植到细胞培养皿中，并培养到约 70-80% 的密度。在转染前，将细胞培养基更换为不含抗生素和血清的培养基，并将细胞培养温度调整到 37℃。
转染。将混合好的转染试剂和质粒 DNA 缓慢地加入培养皿中，使其与细胞均匀混合。根据不同的转染试剂，具体的操作方式可能会有所不同。
培养。转染完成后，将细胞培养基更换为含有抗生素和血清的培养基，并将细胞继续培养。根据不同的实验需求，可以选择不同的时间点进行下一步实验。
需要注意的是，不同类型的骨髓间充质干细胞可能对转染试剂的敏感性不同，因此在进行转染前最好先进行小规模的试验来确定最佳的转染条件。此外，为了确保转染的稳定性和可靠性，可以使用荧光标记的质粒 DNA 和细胞以检测转染效率和稳定性。
Q：筛选维生素 c 最适 pH，连续加热在 0.30.60.90min 测透光率，按理来说越加热应该透光率越下降，因为生成杂质会增加光散射作用，但是实验结果是从 0min 到 30min 透光率反而上升了，这是为什么啊？
A1：可能存在环境温度异常，强的照明或不稳定环境下工作等情况。
A2：主要原因有：操作过程是否规范且准确（试剂称量、溶液配制、试液移取等），选用的紫外-可见分光光度法计是否工作正常，选用的测量条件是否适合（如波长、狭缝宽度等）；比色皿（池）是否洁净，参比溶液的选择是否正确，样品测试吸光度范围是否在仪器测定范围和校准曲线吸光度范围内。
A3：根据您提供的实验结果，透光率在加热 0min 到 30min 之间上升了，这种现象可能是因为在这个过程中，维生素 C 的某些分解产物可能对光线的散射效应有所减弱，从而导致透光率的升高。
此外，在维生素 C 的加热过程中，可能会出现一些反应，例如维生素 C 的氧化或水解，导致生成新的产物或杂质，这些产物或杂质可能会增加光散射的作用，从而导致透光率的下降。不过，这些反应的速率可能不同，可能会导致在加热的某个时间段内，维生素 C 的某些分解产物的光散射作用减弱，从而使得透光率上升。
总之，您所观察到的透光率变化可能是由于维生素 C 的分解反应和产物的光学特性的复杂变化引起的。具体原因需要结合实验条件和结果进行综合分析。建议您对实验结果进行进一步研究和分析。
最后编辑于 2023-03-21 · 浏览 8428
