PLKO.1双酶切空载体切不开

用EcoR1和Age1双酶切PLKO.1空载体，本应该产生一个1700个碱基左右的小条带，但是我重复了三次，都没切开

酶切体系是：PLKO.1 1ug，EcoR1和Age1各1uL，10XBuffer 2uL，ddH2O补齐体系到20uL，37℃酶切1.5h，不知道为什么，反正就是没有切开的质粒 Marker用的是2K Plus Ⅱ，全式金的。