原核表达IPTG诱导问题求助
发布于 2023-03-03 · 浏览 1315 · IP 广东广东
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1、表达菌：BL21(DE3)pLysS；载体质粒pET-3c；培养条件37℃，220rpm
2、最近表达一段小肽3kD左右，诱导表达的时候发现加入诱导剂IPTG后菌体明显减少，含空载质粒和重组质粒的表达菌都有很明显的减少，且进行诱导的实验组没发现明显的目的条带
3、换过其他来源的pET-3c和表达菌，重新制备感受肽和转化、诱导，但是制备感受态的Cacl2没有换，结果还是会明显减少；用过其他课题组的IPTG，同样会明显减少，但是不如自己组的减少得多
4、使用不同时期同组师兄用同一个载体构建的其他目的蛋白重组载体，进行同时诱导的时候，师兄的表达菌诱导后没有明显减少
4、看到有帖子说转数和温度会影响，但是具体针对本实验的影响情况还没做验证
想问一下大家有遇到过类似的问题吗，求建议
最后编辑于 2023-03-03 · 浏览 1315
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