求助！抗菌活性物质过高效液相色谱后活性完全消失，不知道是什么原因

求助各位大神！我是通过高效液相色谱进行细菌素的最后一步分离纯化，我的有机相是纯甲醇，水相是纯水，但是过液相后抑菌活性完全消失，作为对照，我将样品混入相同体积和浓度的甲醇水中处理相同时间，最终浓缩至上样体积后，活性良好未消失，求助各位大神，是我的流动相洗脱能力不够致使我的活性成分被吸附在制备柱上了还是说我的样品有可能不是蛋白类物质😭。我上一步过G-25凝胶柱后样品活性还很好，抑菌活性保持的很不错，所以现在很苦恼，试了好几个流动相洗脱后都没有活性了，求助各位大神！帮帮孩子吧😭