293ET细胞转染效率低
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最近在做293ET细胞转染,80%左右时传代,0.25%胰酶0.5ml室温静置消化3分钟左右,观察有细沙样细胞脱落时加入2-3mlDMEM终止消化(不离心),枪头吹打20下左右,细胞大多成单个。计数铺板,约1万个细胞/孔铺96孔板。24h后lipo3000转染GFP➕PBSK(空载体),质粒与转染试剂比例为1(ug):1.5(ul),每孔10ul质粒和转染液混合物;以下4张图为转染6小时后的细胞状态




转染32小时后,细胞状态如下,细胞状态变化严重(转染试剂的毒性作用)

倒置显微镜观察荧光基本无荧光,测定荧光值,转染了GFP的实验组发光值仅为空白组的2-3倍;如下图所示,第一列为空白组,第2、3列为转染了0.01ug GFP/孔的,4、5列转染0.02ug GFP/孔;6、7为0.04ug,8、9为0.08ug;10、11列转染0.1ug GFP/孔

转染效率非常低,不知道问题出在哪里😭😭😭已经做了几十次了,反复如此,在线求大佬解答!!!感激不尽!!!
最后编辑于 2022-11-18 · 浏览 1085