微管免疫荧光

求助：如何染好微管（α-tubulin）的免疫荧光，我染出来的是糊的，没有清晰的微管网状形态，出不来微管的丝，不知道问题在哪儿，非常感谢

实验步骤：

1 固定 4%多聚甲醛 15min

2 通透0.3% Triton 10min

3 封闭：1%BSA 1h

二抗比例1：200 1h