求助:WB没有条带 背景不干净
查看病例

10%分离胶 5%浓缩胶
电泳 loading buffer 20微 marker 1.5微
蛋白20微
90V跑到marker分离出来 溴酚蓝大概在分离胶
接着换140V跑到溴酚蓝到最下面
转膜100min 350V NC膜
封闭 脱脂奶粉 2g+TBST40g 2h
剪膜 跑的是贝塔actin
一抗 4度摇床过夜
二抗 室温2h
学姐跑出来的都很好
和我的实验只有蛋白 配胶试剂和抗体不一样
蛋白是自己提的 含量测过 14-20mg/ml左右
我用的配胶试剂是自己配的 学姐是碧云天试剂盒的
电泳液没啥问题 用的学姐的
转膜液自己配的 有点黄 不知道为啥
但marker也转上了
但是学姐说我的膜用转膜液泡完之后还是很白
感觉没有她们那种透的感觉
抗体之前有老师说可以跑出来 也换过新抗体 还是没有条带 应该可以排除抗体的问题
跑出来的条带 如图

求求各位大神 救救孩子
最后编辑于 2022-10-13 · 浏览 3177