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求助:WB没有条带 背景不干净

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搬砖狗啦啦啦
    您的案例《求助:WB没有条带 背景不干净》 经同行评议,被丁香园临床病例数据库收录。
收录时间 2025年5月25日
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发布于 2022-10-13 · 浏览 3177 · 来自 iOS · IP 安徽安徽
这个帖子发布于 2 年零 225 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
iconyj1984ren 推荐

10%分离胶 5%浓缩胶 

电泳 loading buffer 20微 marker 1.5微

蛋白20微

90V跑到marker分离出来 溴酚蓝大概在分离胶

接着换140V跑到溴酚蓝到最下面

转膜100min 350V NC膜

封闭 脱脂奶粉 2g+TBST40g 2h

剪膜 跑的是贝塔actin 

一抗 4度摇床过夜

二抗 室温2h


学姐跑出来的都很好

和我的实验只有蛋白 配胶试剂和抗体不一样

蛋白是自己提的 含量测过 14-20mg/ml左右

我用的配胶试剂是自己配的 学姐是碧云天试剂盒的

电泳液没啥问题 用的学姐的

转膜液自己配的 有点黄 不知道为啥

但marker也转上了 

但是学姐说我的膜用转膜液泡完之后还是很白

感觉没有她们那种透的感觉

抗体之前有老师说可以跑出来 也换过新抗体 还是没有条带 应该可以排除抗体的问题


跑出来的条带 如图

img

求求各位大神 救救孩子

最后编辑于 2022-10-13 · 浏览 3177

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