更先进更好的实验细胞转染试用

发布于 2022-10-08 · 浏览 5302 · IP 上海上海

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随着越来越多的生物相关研究领域的扩展，尤其是基因组编辑领域的迅速发展，现有的分子和细胞技术需要得到改进，需要更先进的转染技术来最大限度地发挥其潜在的应用。近年来纳米技术的发展为细胞转染技术提供了新的研发思路。泛瑞FanRi-Trans是最新一代研发合成的纳米转染试剂，属于新一代非病毒转染试剂。其利用细胞对特定尺寸纳米粒的胞吞原理，是经液相超声分散、超离等多级工艺制备合成不同粒径的纳米粒子转染试剂。该纳米粒子呈球形，具有较大比表面积，有利于负载各种核酸分子。纳米粒子经修饰后带有正电荷，能与各类带负电荷的核酸（DNA, siRNA, miRNA等）结合，与核酸稳定结合后，能有效保护核酸被环境中的各类酶降解。由于制备出的纳米粒子-核酸复合物，是纳米级别，能高效被细胞识别并胞吞，进入细胞后，利用纳米粒子上的正电荷产生的质子海绵效应，所负载的核酸能很容易从溶酶体中释放出来发挥功能。纳米粒子-核酸复合物利用仿生原理，能有效降低细胞毒性，适用于体内、体外多种组织和细胞转染。同时该纳米粒子可以与核酸直接混合，不需用其他试剂稀释后再混合，混合后15分钟即可加入含血清、抗生素等完全培养基中进行转染，操作流程十分简便。该产品解决了病毒载体的诸多缺点，如病毒毒性、免疫原性、有限的 DNA 装载量等，并具有高转染效率和低细胞毒性等特点。适用于将小片段RNA，质粒转染各种细胞系、原代细胞等；或将小片段RNA，质粒进行活体组织内转染。与目前常规应用的脂质体试剂相比，其转染过程操作更加简便，转染效率更高，价格低廉。与目前市面上广泛应用的Lipofectamine 3000相比，FanRi-Trans更具成本效益，应用更为广泛。

FanRi-Trans目前开发出两款剂型，FanRi-Trans CE 用于各类细胞转染，FanRi-Trans TI 用于动物体内进行RNA干扰或蛋白过表达实验。转染时只需将转染试剂与待转染的小RNA、质粒按比例混匀，孵育15分钟后即可加入到细胞培养基中或注射到体内组织，操作简便，极大地简化工作流程。FanRi-Trans TI可将小片段RNA或质粒转染到动物体内多种组织，在动物体内进行RNA干扰或蛋白过表达实验。注射后3天即可取组织进行检测相关基因或蛋白的表达情况。FanRi-Trans TI能保护和浓缩核酸，避免核酸被体液中的核酸酶破坏，能耐受体内复杂的环境，且毒性低，不会诱发机体产生免疫反应。

材料与方法

l 质粒及小RNA设计与制备

对于质粒制备，需要用无内毒素质粒抽提试剂盒提纯，确保低内毒素活性和高质量的DNA，质粒浓度一般不低于200ng/uL。为观察转染效率，质粒载体上可以携带荧光基因，比如绿色荧光蛋白GFP等。

对于小RNA制备一般由公司合成，加入RNA-free 酶水稀释至浓度为20μM 即可进行转染。为观察转染效率，小RNA上可以修饰荧光集团，比如Cy5.5等。

l 细胞培养

提前一天将细胞种植在24孔板，以转染时细胞密度在70-80％为宜，1天后，待细胞状态良好时进行转染（注意：细胞处于良好的对数生长期状态具有较高的转染效率）。

l FanRi-Trans CE细胞转染流程（以24孔板为例）

① 在转染前30 min,给待转染细胞更换新鲜培养基。

② 转染复合物制备（以24孔板为例）：将2.5 μL（母液浓度20 μM）小片段RNA或 2.5 μg质粒直接加入到2.5 μL转染试剂中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸混匀），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

③ 将转染复合物加入到培养基中，轻柔混匀，将培养板放回培养箱中培养，转染24后如细胞状态好可不必更换培养基

注意：转染过程中可以采用含血清的完全培养基培养，且有助于提升转染效率。

④ 对于转染带荧光的小片段RNA, 转染6小时后即可应用流式细胞仪，荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测转染效率。如果是检测转染的目的基因mRNA表达水平，推荐在转染后24-48 h检测。如果是检测蛋白表达水平，推荐在转染后48小时后进行检测。