质粒测序正确但是不表达

nrf2基因表达，目的片段1800，用的PcDNA3.1的载体，刚开始是买了带EGFP标签，但是western检测不出来，后来又构建了带flag标签的还是检测不出来。构好后测序都正常的，可是转染后就是不表达啊（阳性对照出来了），求问各位前辈这是什么问题呢？该怎么弄

这个基因已经研究好多年了，且买了发表过文献的质粒，但就是不表达，不知道哪个战友有过表达质粒，给我一点，人源的，非常感谢。