Wb经验贴‖page2 点样

接着昨天的配胶，再补充几个点，补完在接着今天的主题。

一：什么样的胶算好的胶？或者说什么样的胶可以用？

实在的说，看完一个胶，大概的就能知道实验的结果，个人认为胶的好坏决定实验的结果。以下是几个评判点：

1：胶里面有水气泡

昨天的已经讲了，没有很大的影响，只要不是特别特别大的，已经很大了，明眼就知道不行了，（例如昨天发的图，那个还好，可以勉强用）

昨天讲了解决方法

2:配的胶下面残缺了

一般而言，有些人还会漏胶（和认知操作问题）、还有人配胶不混匀，所以最后胶下面空了一小节，大概2-3mm，实在的说，缺了2-3mm，无伤大雅，只要不要太恐怖，因为胶的最下方2-3mm，那个分子量的目的蛋白，你都用不到，换而言之：夸张的说：换个思路，如果你跑个220-180kd的目的蛋白，你就算缺了一半也不是很大的问题。事实上，这个事我师弟也干过，可以成功。

处理方法见前面！

3：配的胶梳子孔洞正下方那里有气泡！

要命！！！！！这个绝对不能用，不能用！！！！！重新配胶！！！！！！！

怎么办?因为什么？

兄弟，你配胶插梳子的时候，慢了一拍，不要慢，一气呵成！！！！！！

4：关于梳子孔洞的最低底线？

梳子孔洞只要下方没有气泡，然后胶柱能包住你加样的目的蛋白，这个就很ok！就很nice!!!（下面有一个草图，草图1号孔就是我说的意思。）

5：梳子空洞有残胶怎么办？

用的长枪头刺进去，把那些残胶挖掉，去掉，挑掉！人工补救，你也可以的。因为师弟技术差，我没少干这事！！！

(还有一些我后面再补充，现在实在想不到了）

以上是补充点，进入今天的正题！

加样点样

一：点样加样的注意点

尽量一次点完，不要分多次，条件一般的用普通10ul的枪头，条件更好的用那个很细的长枪头！

（反正你加样的枪头离胶的柱子越近越好，操作的时候，你的蛋白就不会扣吧）

二:蛋白样品点样前的处理

蛋白药品长期放着会沉淀，所以先98℃加热5分钟，然后2000r，3min离心。抽取样品时，不要一个抽底部，一个抽顶部。

三:量加多少？

主要看你蛋白提取的浓度怎么样？浓度高一点，就相对少一点，10ul，20ul这种，有些人30-40ul都不行。(比如你是组织提取的蛋白，肯定比细胞提取的要拉胯一点啊！）

四:加样加到哪一个空隙？marker怎么设置？

1：这是常见的10孔，我也常用这个跑，15的跑出来好丑，因为你点样的孔洞越小，你错误越大，稍微点多了/岔了，就漏了。

2：如果你跑的是＜10个的条带，就尽量中间靠，567位的孔就很好呀！比如我跑六个带，加完以后，用marker夹一下，如图！

3-8号位加样品A-F，2号9号加marker/sds loading buffer夹一下！这样可以防止我的跑漏了，这个也好看…

3：如果底部有气泡（就是图上标注的）？我用吗？

肯定用啊，本着不浪费的选择，怎么能浪费啊！但是我1号孔不用，2-10号孔正常啊，我其他孔加呗！

4：从冰箱拿出来的胶，孔洞上面有泡沫？有水泡怎么办？

加电泳液的时候，你就往孔洞里面加进去，然后溢满整个电泳槽呗！

电泳篇请听下回分解！