pcr没有目的条带全是弥散

做pcr，因为体系是之前师兄已经摸好的，他一年半以前做的，p出来过图片很清楚，然后现在我换个品种来做，并且换了个pcr仪，产物大小1500bp，却死活p不出来条带，全是弥散，引物，模板，mix全都换过，还是不行。

我是上下游引物各1.5，dna模板2，2*max7.5，dd水2.5，15ul的体系，并且引物跟dd水也都调低过，依旧不行。

然后程序是。

预变性：94度，3分钟

变性：94度，30秒

退火：55度，60秒

延伸：72度，90秒

延伸：72度，7分钟

35循环-45循环都试过了，搞不懂问题出在哪里了，求各位大神帮忙分析下问题出在哪里啊。

并且我重新晒的退火温度，从53-62都试过，都不行，还是出不来条带。

这是退火梯度的图。

是在是搞不出来了，为啥目的条带出不来，marker是2000的。