细胞培养课堂丨Vero细胞无血清培养技术平台

Vero细胞是一种培养疫苗抗原（病毒）的细胞系。

很多人第一眼看到“Vero细胞”这个词后，就会觉得有一种时尚的感觉，但实际上这种细胞是源自于非洲绿猴肾脏上皮细胞。这种细胞系于1962年3月27日由日本千叶大学的Yasumura和Kawakita两位科学家开发。

而Vero的含义既不是来源于科学家的名字，也不是什么缩写。“Vero”这个名字源自于“verda reno”，在世界语（1887年公布的一种人造国际语言，源自欧洲诸语言）中的意思是“绿色的肾”。

另外需要注意的是，虽然“Vero”有这样的含义，但实际上非洲绿猴的“绿”并不是形容肾脏的颜色而是背部的毛色。

参考文件

1.Sheets, R. (2000). History and characterization of the vero cell line. US Food and Drug Administration CfBEaR, ed. US Food and Drug Administration, Silver Spring, MD.

2.Shimizu B (1993). Seno K, Koyama H, Kuroki T (eds.). Manual of selected cultured cell lines for bioscience and biotechnology (in Japanese). Tokyo: Kyoritsu Shuppan. pp. 299–300.

3.Cawthon Lang, K.A. (2006). "Primate Factsheets: Vervet (Chlorocebus) Taxonomy, Morphology, & Ecology". Primate Info Net. Retrieved 2011-01-30.

Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高，使用无血清工艺取代血清工艺培养 Vero 细胞生产病毒疫苗已成为发展趋势。

中生天信和针对Vero细胞开发了ToCell®Vero CD化学成分限定、无血清、无动物源成分的贴壁培养基。

Vero CD细胞培养基产品特点

◆ 无动物源成分    

◆ 无血清   

◆ 无化学成分限定    

◆ 无需细胞驯化  

Vero CD细胞培养基产品应用

适用于新冠疫苗、人用狂犬疫苗、乙脑疫苗、甲肝疫苗、IPV疫苗、EV71疫苗、轮状病毒疫苗、兽用狂犬疫苗、猪腹泻疫苗等领域大规模工业生产等。

Vero细胞无血清培养工艺

（1）细胞方瓶培养

操作参数设置

（1）接种密度： 7x10⁶ cells／T75

（2）培养液： 30ml

（3）传代时间： 72h

（4）传代依据： 细胞在方瓶中长成致密单层后进行传代

（5）培养液pH： 不得低于7.0

（2）细胞工厂培养

细胞复苏后从方瓶扩增至细胞工厂，一个5层细胞工厂约接种300x10⁶cells（按9.5x10⁴cells／c㎡），加培养液200-300ml／层，培养3天，待细胞长成致密单层后进行传代。

细胞工厂传代

（1）缓慢弃去细胞工厂中的培养液，可不加PBS润洗。

（2）直接加入约25ml／层胰酶（Gibco TrypLE™ Express Enzyme（1X））溶液。

（3）充分浸润细胞1-2min后，弃去胰酶，将细胞工厂置于37℃温箱5-6min。

（4）镜检90％以上细胞均变圆变亮后拍打细胞工厂，使细胞分散。

（5）再加入新鲜培养液重悬细胞，并晃动细胞工厂，使细胞分散均匀。

（6）将重悬的细胞倒入无菌容器混匀后取样计数，进行下一步扩增、培养。

细胞培养过程注意事项

（1）保证细胞来源可靠，并检测有无支原体及外源病毒污染。

（2）细胞连续传代次数有限，需采用低代次细胞用于实验。

（3）每次传代使用新的方瓶、细胞工厂。

细胞培养过程异常处理

（1）培养过程中尽可能分开进行种细胞传代。

（2）如遇细胞培养中培养液浑浊，请选择当天不进行细胞实验的房间进行取样镜检，镜检下有明显游动的微生物则很可能是细菌污染，若不是特别明显可取一些培养液在TSA平板中培养24-72h观察。

（3）如遇培养液清澈，但细胞生长明显受限或死亡，请选择当天不进行细胞实验的房间进行取样，进行支原体或外源病毒检测。

（4）确定污染后务必弃去所有污染细胞、停用使用中的培养基，对实验环境进行彻底消毒灭菌后再进行下批实验。