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巨噬细胞raw 264.7给药问题

发布于 2022-05-18 · 浏览 5885 · IP 重庆重庆
这个帖子发布于 2 年零 356 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我需要把细胞种96孔板养24h后,再给药24,但是我现在发现只给溶剂都会让我的细胞状态变很差。

溶剂是7.5微升TAE/Mg 2+(40 mM Tris base (pH 8.0), 20 mM acetic acid, 2 mM EDTA, and 12.5 mM magnesium acetate),然后加空白培养基稀释到100微升

整个实验过程:用到的所有溶液都会在37度预热

1.细胞15000个/孔种96孔板,培养基是10%FBS完全培养基,培养24h;

2.24h后弃掉70微升培养基,然后加200微的空白培养基,再弃去200微的孔内溶液,反复洗三次,最后孔内剩了30微空白培养基(这样做是因为之前做实验换液吸干pbs清洗的时候,发现细胞总会飘起来很多,我以为是换液的时候导致细胞脱落等让我的实验出现问题,就改成了这种方法去除掉旧培养基,细胞在清洗给药过程虽然不飘了,但是发现给溶剂后细胞还是不行);

3.空白孔加70的空白培养基;溶剂组加70微的稀释了药物的空白培养基,最终孔内100微,药物溶液含7.5微,需要给药24h。

4h之后我去观察了一下,细胞还是很好的,很正常。到第二天我再来看就不行了,空白组和溶剂组差得很明显。没有观察到明显的飘起来的细胞,这个溶剂别人也用过,正常来说不应该出现这种情况,如果溶剂都有这么明显的不正常情况,那我后面再做给药的结果也不可靠。我现在唯一能猜测到的是7.5微体积太大了,影响了它的生长,但是空白培养基细胞就长得很好啊(ㄒoㄒ)

想请各位大佬指教一下,我已经卡在这很久很久了

感激不尽!

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最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5885

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