求助|做动物组织ROS，用荧光酶标的方法测出数字特别小是为什么

实验小白求大佬们帮助，我在用大鼠脑组织测试ROS含量，通过一片文献的方法做，但是做出来数值很低，不知道问题出在了哪里，恳请大佬帮忙解答

以下是的文献的方法：脑匀浆在冰冷的0.9%NaCl溶液中(制成1：9的匀浆)。然后将匀浆在4°C下以10000rpm离心10min，收集上清液并在-70°C下冷冻以供以后分析。取样品上清液，在用0.9%NaCl(生理盐水)1：100稀释；然后将100μL该材料与100μL DCFH-DA混合(10μ/L，从二甲基亚砜配制的原液中以1：1000稀释)放入微型板的孔中。反应混合物在室温(RT)的黑暗中放置10min，然后使用485 nm激发和520 nm发射设置进行荧光分析。然后利用相对荧光推算ROS水平。