求助:ELISA检测,样本稀释几个浓度梯度后,OD值没有变化怎么回事

如题,用的酶标生物的试剂盒(检测范围0.156-10ng/ml),检测人体血清HIF-1α浓度,进行预实验,想摸清一下合适的稀释倍数。用了一个正常人A的血清检测最低值,用了一个病情重的患者B检测最高值,两个样本分别稀释了2,5,10,20,40,80倍,血清从负80度冰箱拿出来放4度过夜,融化后没有离心,直接稀释进行检测。样本A的OD值都在标曲范围内,样本B的OD值超出了标曲范围,每个样本测出来的OD值没有梯度变化,是什么原因呢?样本B是不是稀释倍数还不够啊?急求各位大神帮忙分析