BCA蛋白浓度测定，操作步骤，注意事项，问题解析

操作步骤：

①取一只BSA蛋白标准品，加入1ml蛋白标准配置液，完全溶解，即25mg/ml的蛋白标准储备液，放置于-20℃可长期保存

②蛋白标准工作液：取两只离心管，分别标注为1，2。分别加入900ulPBS稀释液，然后取蛋白标准储备液100ul加入至1中混匀，从1中取100ul加入至2中混匀。2即为蛋白标准工作液，浓度为0.25mg/ml。

③绘制标准曲线：将蛋白标准工作液分别按0、2、4、8、16、24、32、40ul加入到96孔板中，然后用PBS稀释液将每孔补足为20ul。得到蛋白浓度依次为0、25、50、100、200、300、400、500ug/ml。

④将待测的蛋白样品进行适当稀释（使用PBS稀释液进行稀释），然后每个样本取20ul加入96孔板中。

⑤配制BCA显色工作液：将BCA-A试剂与BCA-B试剂按50：1体积比充分混合均匀，得到BCA显色工作液（根据样本数量配置）。可室温保存，24小时内使用。

⑥向标准曲线样品孔和待测样品孔中每孔加入200ul BCA显色工作液，充分混匀，37℃反应30min后，以标准曲线0作为参照，在562nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。（室温下反应2小时，60℃反应30min，如果蛋白浓度较低，建议置于60℃反应）

⑦计算：以标准曲线样品浓度与吸光值绘制标准曲线。根据所测样品的吸光值带入标准曲线公式中计算出待测样品浓度。

博尔夫官网有完整操作步骤，还有病理染色，组化荧光WB之类的，值得参考。对应的试剂官网也有的定。